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抗HepG2核糖体展示抗体库的构建

安徽农业科学.JournalofAnhui埘.Sci.2009。37(13):5886—5888 责任编辑李占东责任校对况玲玲 抗HepG2核糖体展示抗体库的构建 周雷,毛伟平*,冯娟,刘洪云,魏传静,李文秀,周凤云 (南京师范大学乍命科学学院生化与生物制药研究所,江赫京2加m6) 录合成第一奈链.PcR扩增重链可变区和轻链k,经linker 转化E.coli TGl,蓝白斑筛选,挑取白色茵落,提取质粒,PcR鉴定.并测序.『结果1VH和k链得到正确的扩增,长度分别为399和647 093 bp,Ⅵ∥k连接产物正确,连接产物长度为lbp:[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗HepG2核 糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗}IepG2特异性单链抗体奠定基础。 关键词 核糖体展示;单链抗体;肝癌;抗体库 中图分类号Q78 文献标识码A 文章编号晒17—66ll(2009)13—05886—03 Const晌of Ami-l-kl以2Rm伪伽唯DisplayLibrary 刁m叭ILei of and Normal et蚰(Institute of 21(I)46) BiochemistryBiologicMPreparations,CollegeLife&ience,NanjirIgUniversity,Nanjing,Jiangsu AbsWaa aimwasto BaⅣf-micewereinmmized4timeswith J111e constructanti.HepG2 Medaod [Objective riIⅢm℃displaylibrary.I HepG2.1he fromthe of totalRNAw∞is【lated ofimmunizedmitre.111ecDNAwaft bv/L-welse region chainandkc11aill spleens generated transcription.Variableheavy wascorI!;tructed andk)weTe chainri‰me asse曲li诹VIIandkintoⅥ∥k genes(VII amplifiedseparately,aManti.t|epG2、TI/k displaylibrary by chainwitha constructedlinkerDNAPcR.1heV彬kchainWasI妇tedinto vectorandthe wastransformedinto specially by pMDl8-T ligated.sal_nple E.coliTGI.whitecloneWit8 andthe DNA DNA惝identifiedwithPcRand corrrdetent picked pIasmidw鹅删ed.仉plasmid sequenced.IResultsl VHandkweIe andthe were399arm647 was andthe wasl 093 Coneh. amplified le,1f;【h I,p lengt

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