淋巴细胞亚群测定在同种异体肾移植术后的应用.docVIP

　　淋巴细胞亚群测定在同种异体肾移植术后的应用 作者：邬露丹 徐炜峰 丁金飞 【关键词】 肾移植 　　免疫排斥反应是引起实体器官移植失败的主要原因，其发生 发展 与患者的T、B、NK细胞水平有关。为了准确地反映患者体内的免疫功能，作者 应用 流式细胞仪，对120例临床肾移植术后患者外周血淋巴细胞亚群的绝对值进行测定，同时对不同的分组情况进行 分析 ，现报道如下。 　　1 资料与 方法 　　1.1 一般资料 1995年3月至2006年12月，在本院接受同种异体肾移植（RT）手术的120例患者，男68例，女52例；年龄23～78岁。手术后常规剂量应用环孢素A、骁悉、强的松等抗排异药及新生霉素、氧哌嗪等抗炎药物。根据其术后是否顺利恢复，有无急、慢性排斥反应及各种并发症分组：(1)肾移植后顺利恢复组：38例肾移植术后6个月内，无急、慢性排斥反应，无各种细菌、病毒感染及各种手术并发症，给予环孢素A、骁悉、强的松等抗排异 治疗 ，查肾功能正常。(2)肾移植后急排组：11例肾移植术后早期肾功能恢复正常。术后3个月内发生急性排斥反应，经激素冲击治疗，移植肾功能逆转。(3)肾移植后慢性排斥组：21例肾移植术后，8个月～11.5年间出现肌酐、尿素氮升高、尿蛋白等肾功能减退症状，被诊断为慢性排异反应，给予强的松，新塞地平等抗排斥反应治疗后有所稳定。(4)肾移植后有并发症组：20例肾移植术后有各种细菌、病毒感染如尿路感染、巨细胞病毒感染等给予头孢呋辛等抗感染治疗后身体及肾功能恢复良好者。(5)正常对照组：为本院健康体检者30例。 　　1.2 仪器与试剂 FACS Calibur流式细胞仪、试剂购置于美国B-D公司，包括荧光标记单克隆抗体试剂盒，溶血素（FACS Lysing Solution）等；美国贝克曼-库尔特公司的LH 750血球计数仪及其相应的配套试剂。 　　1.3 检测方法 取空腹静脉血，用EDTA抗凝，按照说明书要求，经四色荧光微球校准流式细胞仪后，用Simulset软件获取与分析，测得T淋巴细胞各亚群的百分比，同时通过检测患者的血常规，测得淋巴细胞绝对值，把上面两数值相乘，得到每μl全血中T淋巴细胞亚群的绝对值。见表1。 　　1.4 统计学处理 采用SPSS 12.0统计软件，所有资料均用（x±s）表示，采用成组t检验。 　　表1 肾移植术受者淋巴细胞亚群绝对值测定结果（略） 　　与对照组比*Plt;0.05，＃Plt;0.01 　　3 讨论 　　随着免疫抑制剂的不断推陈出新，肾移植作为治疗终末期肾衰竭的重要措施被较多地采用。移植术后患者会有多种不同的临床表现，其中每个个体的免疫状态的不同与其疾病的发生、发展、预后呈现一定的关系［1］。为全面评价肾移植受者的免疫状况，作者检测了肾移植术后临床表现不同的患者淋巴细胞亚群的绝对值，分别代表TH、TC、NK、B四种主要淋巴细胞的分化抗原,可特异地反映受者机体细胞免疫及体液免疫的功能状态。 　　肾移植术后顺利恢复组大部分淋巴细胞亚群免疫表型阳性细胞数接近临床正常值，由于免疫抑制剂的联合 应用 对NK细胞有明显抑制作用［2］，又由于CSA对免疫系统的作用主要是抑制CD4+细胞及对T细胞的活化有重要作用的IL-2、IL-4等因子的基因表达，对CD8+细胞作用较小，所以该组患者CD3+、CD4+细胞和NK细胞都受到一定程度的抑制，其中NK细胞下降尤其显著(Plt;0.05)。肾移植术后急性排斥组CD3+、 CD3+～CD4+、CD3～CD19+细胞数增加明显（Plt;0.01），NK细胞数增加（Plt;0.05），CD4+／CD8+比值增高（Plt;0.01），在排斥反应发生前期，淋巴细胞绝对值增加，虽然有许多细胞参与急性排斥，但T细胞是绝对必需的，因为针对外源蛋白抗原的体液和细胞介导的免疫反应都需要CD4+ T细胞的识别后才会有一系列后续的效应。本实验中的NK细胞也有明显增加,此 研究 结果与国内外相关研究结论相吻合［3，4］，在同种器官移植排斥反应的效应阶段，可检测到NK细胞活性增高，且与排斥反应的程度有一定的相关性。因此，早期监测T、B细胞、NK细胞的变化对预测排斥反应的发生有重要意义。肾移植术后慢排组表现为CD3+、CD3+～CD8+细胞数增加（Plt;0.05），NK细胞数降低（Plt;0.01）、CD4+/CD8+比值下降（Plt;0.05），在移植免疫中，CD3+～CD8+细胞数增高即CTL对靶细胞的杀伤已成为免疫系统清除同种异体细胞最重要的方式和途径，遏制CTL的活化才有助于延缓移植物的排斥；在本实验中可能促使排斥反应发生的NK细胞尽管有一定程度的抑制，但依然有慢性排斥反应的发生。究其原因，依据Banff分类标准，肾移植术后慢性排斥反应被定义为慢性同种移植肾病（C