渗漉法提取丹参脂溶性部位的工艺研究.docVIP

　　渗漉法提取丹参脂溶性部位的工艺研究 【摘要】 　　目的探讨丹参饮片中采用渗漉法提取脂溶性部位的最佳工艺条件。方法以丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量为指标，采用L9(34)正交实验进行提取工艺全面优选，并用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定其含量。结果最佳乙醇渗漉工艺为：药材粉碎至绿豆粒大，用15倍量95%乙醇冷浸24 h后，渗漉速度3 ml/min。结论采用渗漉法提取丹参中脂溶性部位，操作简便，方法可行，降低了生产成本，提高了药材利用率，使实验结果具有实际应用价值。 【关键词】 丹参； 正交实验； 丹参酮ⅡA； 隐丹参酮 　　Abstract：ObjectiveTo study the best extraction method of the liposolubility active principles of Rhizoma Salviae Miltiorrhizae.MethodsThe extraction process ined by RP-HPLC as index．ResultsThe best extraction condition of liposolubility part es 95% alcohol, after 24 hours cold-soaking, percolatEing l/min.ConclusionThe extraction method for Rhizoma Salviae Miltiorrhizae can save time and energy and be suitable for the modern production． 　　Key iltiorrhiza; Orthogonal design; Tanshinone ⅡA; Cryptotanshinone 　　丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。味苦，微寒，归心、肝经，具有祛淤止痛、活血通经、清心除烦之功效，用于月经不调、经闭痛经、癥瘕积聚、胸腹刺痛、疮疡肿痛、心烦不眠、肝脾肿大、心绞痛等病症。 　　丹参水溶性成分主要有丹参素以及丹参酚酸类，对这一部分的研究较多。丹参的脂溶性成分主要为丹参酮类化合物，主要成分有丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、二氢丹参酮等，具有天然抗氧化活性、天然心血管药理作用以及抗菌消炎作用，还具有明显的抗肿瘤作用。 　　1 器材 　　Aglient1100系列液相色谱仪（美国惠普公司）；丹参酮、隐丹参酮对照品（ 中国 药品生物制品检定所）；丹参饮片（南京本草药店），经自我鉴定为丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的根。 　　2 方法与结果 　　2.1 丹参提取脂溶性成分指标的建立 　　2.1.1 干膏率测定参照2005年版《中国药典》附录XA浸出物测定法，精密量取相当于丹参5 g的药液，置于已干燥恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，移于干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量， 计算 干膏收率，干膏收率（%）=干膏重量/丹参重量×100%。 　　2.1.2 丹参酮ⅡA、隐丹参酮的含量测定预试发现，由于丹参中丹酚酸类成分在波长268 nm处有着较强的紫外吸收，在进行提取工艺考察时，许多工艺在脂溶性成分被提出时，水溶性成分同时被提出，从而使UV法测定总丹参酮含量的方法在提取工艺考察过程中很不精确，故通过使用HPLC测定丹参酮ⅡA以及隐丹参酮的含量，对丹参脂溶性部位的提取工艺进行评价。 　　色谱条件：色谱柱为Scienhome KromasilC18(150 mm×4.6 mm)及预柱， 流动相为甲醇-水(75∶25 )，检测波长270 nm，柱温30℃，流速0.8 ml /min，理论板数以丹参酮ⅡA，隐丹参酮计均不低于2 000。图谱见图1～2。 　　图1 隐丹参酮、丹参酮ⅡA的色谱图（略） 　　图2 样品色谱图（略） 　　丹参酮ⅡA储备液的制备：精密称取用五氧化二磷干燥5h的丹参酮ⅡA对照品4.82 mg置50 ml棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。 　　隐丹参酮储备液的制备：精密称取用五氧化二磷干燥5 h的隐丹参酮对照品4.83 mg置25 ml棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。 　　混合标准品溶液的配制：精密量取2 ml丹参酮ⅡA储备液和1 ml隐丹参酮储备液置5 ml棕色容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，最终浓度为丹参酮ⅡA 38.56 μg/ml，隐丹参酮38.64 μg/ml。 　　标准曲线绘制：精密吸取上述混合标准品溶液2, 6, 10, 15，20 μl依次进样，在上述色谱条件下测定，记录色谱图、峰面积值，并以峰面