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植物体内磷主要以有机磷如核酸、磷脂、植素等的形态存在于植物组织中，有机磷须经干灰化或湿灰化分解转变为无机正磷酸盐。溶液中磷一般用比色法测定。 湿灰化应用不同比例的HNO3、H2SO4、HClO4的方法较为普遍，湿灰化法的消煮温度不会超过混合酸的沸点，灰分元素不会形成难溶的硅酸盐，而且当用H2SO4或HClO4消煮时，可使SiO2充分脱水且使其吸附作用降至最低限度，不致造成灰分元素测定产生显著的负误差。但是由于试剂用量大，会带来污染的危险，试剂空白值大。当然加有HNO3的湿灰化法， 则不能在消煮液中同时测定氮。 在干灰化法中，所用的温度有所不同，一般建议灰化温度不超过500℃，而时间为2~8h，近年来，改进的干灰法中， 添加一些“助灰化剂”，在灰化时通O2，添加KHSO4等，帮助灰化；干灰化添加试剂量少，污染的可能性比湿灰化小，而且简便易行。对于植物全磷的测定用H2SO4- H2O2消煮法，同时测定氮、磷和钾较为方便。总之，方法的选择应根据测定元素的各类、具体条件来决定。溶液中磷的测定，最常用的钼蓝比色法和钒钼黄比色法，可根据样品中磷的含量选用测定方法，当磷的含量高时，选用钒钼黄法为佳，反之则可用钼蓝法。 植株中磷的测定(H2SO4- H2O2消煮，钒钼黄比色法) .1方法原理 植物样品经H2SO4- H2O2消煮分解制备待测液(同 HYPERLINK /analysis/05wenbengjiaoan/ziyuanhuanjingfenxiwangluokejian/page/c13/c13-2-1.htm \l .4操作步骤 .4)。 待测液中正磷酸能与偏磷酸盐和钼酸盐在酸性条件下作用形成黄色的杂聚化合物钒钼酸盐，其组成沿不能十分肯定，有人认为是P2O5·V2O5·22MoO3·nH2O。溶液的黄色很稳定，其深浅与磷含量成正比，可用比色法测定磷的含量。比色时可根据溶液中磷的浓度选择比色波长400~490nm，磷的浓度高时选择较长的波长，较低时选用较短的波长。钒钼黄法要求比色液中酸的浓度(即终浓度)很宽，极限是0.04~1.6mol·L-1(H+)；酸度太高时显色不完全或不显色，太低时则可能生成沉淀或其它物质的颜色。钒酸盐的终浓度范围是8.0×10-5~2.2×10-3 mol·L-1，通常用后一种浓度。钼酸盐的终浓度范围是1.6×10-3~5.7×10-3 mol·L-1。在正常的室温变化范围内对黄色强度无影响。黄色发生很快，在最初15min内会降低约1.3%，以后至少2h内很稳定，在24h内也无显著变化。 本法操作简便快速，准确度和重复性较好，相对误差约为1~3%；灵敏度较钼蓝法低，适测范围广，约为1~20 mg·L-1；对酸的浓度要求不严格，容易控制，在HNO3、HCl、H2SO4、HClO4等介质中都可适用；干扰离子少，特别是Fe3+的允许量远高于钼蓝法，因此该法广泛用于植物和有机肥料样品中磷的测定。 .2主要仪器：消煮管(瓶)；控温消煮炉；分光光度计。 .3试剂 1. 钒钼酸铵试剂：称(NH4)6MoO24·4H2O12.5g 溶于200mL水中。另将偏钒酸铵 (NH4VO3) 0.625g溶于沸水150mL中，冷却后，加入浓 HNO3 125mL，再冷却至室温。将钼酸铵溶液缓慢地注入钒酸铵溶液中，随时搅拌，用水稀释至500mL。 2. 6mol·L-1 NaOH溶液：称NaOH 24g溶于水，稀释至100mL。 3. 2,6-二硝基酚指示剂：2,6-二硝基酚0.25g 溶于100mL水中。其变色范围是pH2.4 (无色)~4.0(黄色)。变色点是pH3.1。 4. 50μg·mL-1 P 标准溶液：准确称取经105℃烘干的KH2PO40.2195g，溶于水，移入1000mL容量瓶，加水至约400mL，加浓硫酸5mL，用水定容。装入塑料瓶中低温保存备用。 5、其它试剂同 HYPERLINK /analysis/05wenbengjiaoan/ziyuanhuanjingfenxiwangluokejian/page/c13/c13-2-1.htm .3 。 ?.4操作步骤 吸取 HYPERLINK /analysis/05wenbengjiaoan/ziyuanhuanjingfenxiwangluokejian/page/c13/c13-2-1.htm \l .4操作步骤 .4消煮好经过滤的待测液20~25mL(含P 0.25~1.0mg)，置于50mL容量瓶中，加2,6-二硝基酚指示剂2 滴，用6mol·L-1? NaOH溶液中和至刚呈黄色，加入钒钼酸铵试剂10.00mL，用水定容。放置15min后用波长450nm，在分光光度计上比色，以空白液调节仪器零点。 标准曲线制作：分别吸取50μg·