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第八章 植物离体培养育种 植物离体培养的概念与应用: 花药和花粉培养与单倍体育种: 植物离体培养的概念与应用 植物离体培养的概念： 植物离体培养的类型： 植物离体培养在园艺植物育种中的应用： 植物离体培养：即广义的植物组织培养，是指通过无菌操作，将植物的组织、器官、细胞以及原生质体等接种于人工配制的培养基上，在人工控制的环境条件下进行培养，以获得再生的完整植株和生产具有经济价值的其他生物产品的一种技术。是现代生物技术的一个重要组成部分。 植物离体培养的类型（按外植体的种类和培养目的来分）: 胚胎培养 组织培养 器官培养 花粉培养与花药培养 细胞培养 原生质体培养 外植体explant ：在离体条件下，把由活植物体上分离下来进行培养的部分称为外植体。 植物离体培养在园艺植物育种中的应用 扩大变异范围 克服远缘杂交的一些障碍 获得体细胞杂种 倍性控制 突变的诱导和离体选择 加速亲本材料的纯化 快速无性繁殖 获得脱毒苗 种质资源的试管保存 可作为外源基因转化的受体系统 花药和花粉培养与单倍体育种 单倍体在植物育种上的重要性 花药和花粉培养技术 单倍体植株的染色体加倍 自然加倍 人工诱导加倍 从愈伤组织再生二倍体植株 对于二倍体植物而言，单倍体只有一个染色体组，减数分裂时染色体不能正常联会，单套染色体全部同时分配到一个性细胞的机率极小。 具有配子染色体数(n)的个体。 单倍体植物是高度不育的。 单倍体的概念 单倍体本身没有利用价值。 单倍体与二倍体的形态基本相似，但其生活力较弱、植株矮小、叶片较薄、花器较小。 单倍体植株的特征 单倍体在植物育种上的重要性 单倍体染色体加倍可获得纯合二倍体 有利于远缘杂交新类型的培育和稳定 与诱变育种相结合可加速育种进程 可作为外源基因转化的受体系统 单倍体育种的概念 人工培养花药，使花药中的单倍体细胞(花粉)单性发育成单倍体植株，经染色体加倍成为纯系，然后进行选育的一种育种方法。 我国单倍体育种的研究处于世界领先地位，已培育出一些烟草、小麦、水稻等高产品种。 ♀ × ♂ F1 减数分裂 不同基因型 的雌配子 不同基因型 的雄配子 异质结合 (自交) 各种杂合的F2 异质结合 (自交) 各种杂合的F3 异质结合 (自交) 纯系 杂合的Fn ……. 各种基因型 的纯系 花药 各种基因型的 单倍体植株 人工培养 染色体 加　倍 常 规 育 种 单倍体育种 5-6年 2-3年 1.克服杂种分离, 缩短育种年限 AABB AABb AaBB AaBb AABb AAbb AaBb Aabb AaBB AaBb aaBB aaBb AaBb Aabb aaBb aabb AaBb F1 P AAbb × aaBB 配子 Ab aB AB Ab aB ab AB Ab aB ab AABB AAbb aaBB aabb 加倍 单倍体 花培 纯系 减数分裂 ♀ ♂ 结合 AB Ab aB ab ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 2.提高选择效率 单倍体的每一种基因只有一个 在诱变育种中，突变一旦发生，在单倍体植株上就能表现出来，可以较准确地检查高等植物的突变率。 纯合的二倍体 染色体加倍 性状得到表现 单倍体是研究基因性质的良好材料 3.有利于突变的研究 远缘杂种 在远缘杂种的花粉中，有极少数的花粉是可育的 通过人工诱导花药获得花粉植株，再经染色体加倍成纯合的二倍体，克服远缘杂种不育性和不稳定性。 高度的不育性 高度不稳定性 4.克服远缘杂种不育性和不稳定性 植物细胞的全能性----植物体的任何一个细胞都含有该物种的全套“遗传信息”，具有发育成完整植株的潜在能力。 花药诱导的实质----花粉培养 花粉培养的理论根据 花粉的单倍性 植物细胞的全能性 反足细胞 极核 助细胞 卵细胞 优良的杂种一代植株的花药或杂种二代中选择出的优良植株的花药进行诱导培养。 易于诱导的材料为亲本 1 2 3 4 单核靠边期 四分体之一 花药 载玻片 花粉挤出 醋酸洋红 盖上盖玻片压片 显微镜下观察 ? 1.花粉发育期的检查 MS H white N6 BN 适应范围最广 微量元素 水 大量元素 维生素 蔗糖 琼脂 配制好的培养基 三角瓶或试管 分装 棉塞和包装纸 封口 高压灭菌(121℃，1100克/cm2 )15~20分钟。 2.培养基的配制 类别 化合物 培养基浓度(mg/L) 大量元素 CaCl2.2H2O 440 KNO3 1900 MgSO4.7H2O 370 NH4.NO3 1650 KH2 PO4 170 微量元素 MnSO4.4H2O 22.3 ZnSO4.7H2O 8.6 H3BO3 6.2 KI 0.83