硬膜外应用虎纹镇痛肽I对自体神经移植大鼠脊髓背角cfos表达的影响.docVIP

　　硬膜外应用虎纹镇痛肽I对自体神经移植大鼠脊髓背角cfos表达的影响 【摘要】 　　目的 通过观察硬膜外给予虎纹镇痛肽I对大鼠自体神经移植模型机械痛阈与脊髓背角cfos表达的影响，探讨虎纹镇痛肽I对再生神经神经性疼痛的影响。方法 雄性ethods Totally 60 male group (group C). The machinery pain threshold and cfos expression easured 27 days after the operation. Results All indicators in group A and B those in group C. Remarkable differences in machinery pain threshold and cfos expression ote its recovery. Key，到达脊髓腰膨大水平。在管的中段预先用封口膜缠一小结球以确定插入深度，缝合小球固定在颈背肌，通过留在外面的PE10进行给药[3]。B组观察1周后，三组大鼠行坐骨神经自体神经移植模型制备。1%硫喷妥钠5～7 mg/kg腹腔注射麻醉后，大鼠俯卧，右股后外侧纵行切口，自肌间隙进入，分离出右侧坐骨神经，于坐骨神经中段、胫神经和腓总神经分叉近端操作。A组及B组分离出右侧坐骨神经后于坐骨神经中段，胫神经和腓总神经分叉近端切取神经10 mm，即用9/0无创伤缝线显微镜下行原位神经移植；C组坐骨神经仅于空气中暴露5 min后，还复至原位，术毕逐层关闭切口。所有手术操作均在SXP1型显微镜（上海医用光学仪器厂生产）下进行。术后常规注射青霉素抗炎治疗，分笼饲养。B组模型制备术后6 h起每天硬膜外给予Hg/kg深麻醉后，心脏灌注生理盐水，再以4%多聚甲醛300 mL心内灌注固定。取脊髓L4～L6节段，置于相同固定液中固定24 h，石蜡包埋、切片，以免疫组织化学SP法检测cfos表达。显微镜下观察fos阳性反应性神经原个数。每只大鼠取5张fos蛋白表达最多的切片，对术侧脊髓背角I～II层fos蛋白阳性表达细胞进行计数统计。 　　1.4 统计学处理 用SPSS 11.0软件进行统计分析，所有计量资料采用均数±标准差(±s)表示，组间比较采用配对t检验，组间采用单因素方差分析，Plt;0.05为差异有统计学意义。 　 　2 结果 术前各组机械刺激阈值无差异。A、B组术后均表现为右后肢拖行，右后肢肌肉萎缩及关节僵硬；C组大鼠术后右足承重基本恢复。 　　2.1 机械痛阈测定 A、B两组术后机械痛阈与基础痛阈比较均有显著差异，Plt;0.05。A、B两组机械痛阈与C组比较均有显著差异，Plt;0.05。C组机械痛阈与基础痛阈比较无差异，Pgt;0.05。A组术后45 d机械痛阈与27 d比较显著升高，Plt;0.05。B组术后45 d机械痛阈与27 d比较显著升高，Plt;0.05。B组机械痛阈较A组低，Plt;0.05。见表1。表1 机械刺激退缩阈值(略) 　　2.2 fos蛋白阳性细胞计数 A、B组计数与C组比较均有显著差异，Plt;0.05。A组组内比较，术后45 d和27 d的计数比较有统计学差异，Plt;0.05。B组组内比较，随时间进展fos蛋白阳性细胞计数有下降趋势，但45 d和27 d的计数比较无统计学差异，Pgt;0.05。A、B组间比较fos蛋白阳性细胞计数差异显著，Plt;0.05。见表2。表2 脊髓背角cfos表达阳性细胞计数(略) 　 　3 讨论 坐骨神经自体神经移植模型再生神经生长进入去神经支配区域时，触觉可诱发疼痛和脊髓背角浅层cfos表达及疼痛相关行为。重复触觉刺激引起脊髓背角浅层cfos表达明显增高和机械痛阈稳定和明显的降低，说明被损神经再次支配靶器官，但感觉功能没有正常恢复。伴随着感觉功能恢复，动物表现出机械痛觉超敏状态[47]。而本实验结果表明应用虎纹镇痛肽I组fos表达阳性细胞数及机械刺激退缩阈值均有显著差异，显示应用虎纹镇痛肽I能明显减轻再生神经的神经性疼痛。 神经元钙通道的主要作用是调控去极化诱导的Ca2+内流。Ca2+内流可以触发细胞内Ca2+依赖的一系列生理反应，包括神经元兴奋性的调节、神经递质释放、激活第二信使和基因转录等[8]。其功能主要为触发神经递质释放，这些物质包括：谷氨酸、乙酰胆碱、去甲肾上腺素、多巴胺、γ氨基丁酸、P物质及降钙素基因相关肽等，其中谷氨酸和P物质与疼痛关系最为密切。谷氨酸作用于突触后膜NMDA、AMPA、海藻酸受体及代谢型谷氨酸受体，P物质作用于突触后膜神经激肽1受体，通过开放偶联的阳离子通道，以及G蛋白、蛋白激酶C、一氧化氮、Ca2+等参与的一