3色谱分析样品的预处理技术.ppt

3. 甲醇——氯化氢或浓硫酸催化 RCOOH+CH3OH RCOOCH3+H2O 4季铵盐法 RCOOH+(CH3)4 →RCO · (CH3)4 →RCOOCH3+N(CH3)3 * * 酰化 酰化用于羟基、巯基和氨基的衍生化，降低这些基团的极性，改善其色谱性能，并提高这些化合物的挥发性，也能增加某些易氧化化合物（如儿茶酚胺）的稳定性。当酰化时引入含卤素离子的酰基时，还能提高负化学源的灵敏度。 * * 常用的酰化试剂有酰卤、酸酐和反应活性的酰胺（如乙酸咪唑）。 也可采用：提取物吹干后加入乙酸酐和吡啶（3：2），60oC衍生化30min或微波衍生化后，吹干，甲醇或正己烷溶解进样。 乙酰化方法常用于体内药物的筛选。一般尿液酸水解后经乙酰化可以筛选大多数临床药物。 * * 三氟乙酰化/五氟丙酰化/七氟丁酰化 常用的含氟酰化试剂有： 三氟乙酸酐 TFA 五氟丙酸酐 PFPA 七氟丁酸酐 HFBA 其反应活性为：TFAPFPAHFBA 提取物吹干后加50～100 μl 衍生化试剂，60oC衍生化30min。 含氟酰化后，引入电负性很强的氟，用负化学源（NCI）有很高的灵敏度。 使用七氟丁酸酐衍生化一些分子量较小的如苯丙胺类等，生成分子量适中的衍生物，有利于质谱分析 * * 多氟酰化反应的时间取决于酰化试剂的活性和目标化合物的活性。如：麻黄碱和伪麻黄碱及其同系物与三氟乙酰酐在60°C时5min可反应完全；三环类抗抑郁药与七氟乙酰酐在60°C时10min可反应完全；哌可酸、脯氨酸、谷氨酸、氨基丁酸的甲酯与HFBA反应时，需在120°C时20min才能完成。 一般情况，多氟酰化反应不需溶剂，但也有例外。有时还需加碱性催化剂。如胺和酚的多氟酰化常用苯为溶剂，三乙胺为催化剂；糖类的三氟乙酰化是在三氯甲烷中，用砒啶为催化剂。 * * 常用的硅烷化试剂 硅烷化试剂中的烷基硅烷基和反应物中的羟基或胺基上的氢发生交换，形成烷基硅烷基产物。常用的硅烷化试剂有： N，O－双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）和N，O－双三甲基硅基乙酰胺（BTA）：能衍生化胺基和羟基。常用于体内药物及其代谢物的检测。 硅烷化衍生化方法是气相色谱样品处理中应用最多的方法，它是利用质子性化合物（如醇、酚、酸、胺、硫醇等）与硅烷化试剂反应，形成挥发性的硅烷化衍生物。 常用的硅烷化试剂 N－甲基叔丁基二甲基硅基三氟乙酰胺（MTBSTFA）：常用于药物、类固醇的检测。由于叔丁基二甲基硅基有较大的空间效应，有些胺基较难衍生化。在质谱检测中，该衍生物很容易失去叔丁基形成较强的(M-57)+离子，有利于作为MS-MS的母离子。 N－甲基三甲基硅基三氟乙酰胺（MSTFA）：最常用的硅烷化试剂之一。衍生化也是引入三甲基硅基。 能进行硅烷化的化合物的反应活性一般为： 醇酚羧酸胺酰胺， 反应活性还受空间位阻的影响；其醇的反应活性为： 伯醇仲醇叔醇， 胺的反应活性为： 伯胺仲胺 * * 硅烷化的一般条件 常用的硅烷化试剂的一般衍生化条件： 在吹干的提取物残渣中加入100μl的MSTFA或BSTFA，加入50 μl的吡啶或乙腈，或用事先配好的衍生化试剂中加催化剂（三甲基碘硅烷TMSI或三甲基氯硅烷TMSCI）和抗氧剂（硫代赤藓糖醇）。 衍生化小瓶加盖后在60oC衍生化5～30min，或微波衍生化2～3min，视不同化合物而定。 残渣吹干水分对衍生化十分关键。因为衍生化试剂MSTFA和BSTFA遇水立即分解。 砒啶是硅烷化反应中最常使用的溶剂。尽管砒啶可能是色谱峰出现拖尾现象，但由于其为酸清除剂，从而有利于反应的完全。 必须注意，对固定相中有活泼氢成分的色谱柱，硅烷化试剂不能直接上柱。因为柱上的活泼氢将被硅烷化。如CARBOWAX柱。 * * 氯霉素的化学结构 * * 化学名:2,2-二氯-N-[2-羟基-1-(羟甲基)]-2-(4-硝基苯基)-乙基]乙酰胺 CAS编码56-75-7。 分子式：C11H12O5N2Cl2 分子量：323.14; 衍生化 沸点高 极性强 质谱的背景噪音高 * * 氯霉素衍生物 氯霉素检测特点 倍 Note how, in the previous slide, the flow rate was specified. This is because ion exchange can be more sensitive to flow rate than polar and non-polar extraction. Sometimes, very slow (e.g. gravity feed) is used in some c