紫苏提取物抗氧化活性及酚性成分的研究.docVIP

　　紫苏提取物抗氧化活性及酚性成分的研究 作者：冯蓉洁， 吕佩惠， 盛振华， 吴巧凤 【摘要】 　　目的研究紫苏体外抗氧化活性。方法在测定紫苏各酚性成分含量基础上，采用体外抗氧化实验，研究其DPPH清除能力、总还原力和抗脂质体氧化能力。结果75%乙醇和50%丙酮提取物具有良好的抗氧化活性；紫苏提取物中总黄酮、原花色素含量与其抗氧化能力之间呈正相关。结论紫苏有显著的抗氧化活性，呈一定的量-效关系。其抗氧化活性可能与黄酮类化合物有关。紫苏提取物可作为一种良好的天然抗氧化剂应用于临床。 【关键词】 紫苏 总黄酮 原花色素 抗氧化活性 　　紫苏为唇形科紫苏属Perilla frutescens (L.) Britt.一年生草本植物，是传统的药食两用中药，在江浙各地均有种植，资源丰富，价格低廉。其主要含有紫苏苷、原花色素、紫苏素、木犀草素和芹黄素等多酚类化合物，具有抗炎、镇痛、抗衰老、清除和抑制自由基等作用［1］。有研究表明，紫苏叶中含有丰富的黄酮类化合物，具有清除自由基、抗衰老作用；紫苏的水溶性色素亦具有一定的抗氧化活性［2～3］。目前国内外研究主要集中在紫苏籽挥发油成分上，对紫苏尤其是紫苏的酚性成分研究较少。本文通过体外抗氧化实验，确定紫苏有效部位抗氧化活性及酚性成分组成，为其临床应用及各种成分的抗氧化药理作用研究提供理论依据。 　　 1 仪器及试剂 　　1.1 仪器BS224S精密 电子 天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司),TU-1900双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），KQ-250DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。 　　1.2 试剂和材料紫苏采自浙江杭州，经浙江中医药大学资源鉴定教研室姚振生教授鉴定为唇形科紫苏属植物Perilla frutescens (L.) Britt.，粉碎后过40目筛。芦丁（批号100080-20030）、儿茶素（批号877-200001）、没食子酸（批号110831-200302），均购自 中国 药品生物制品检定所；大豆卵磷脂（批号2075523）、DPPH（批号095K1452），均购自sigma公司。其他试剂均为分析纯。 　 　2 方法与结果 　　2.1 供试品溶液的制备取5 g紫苏药材粉末，分别按表1加入20倍量提取溶剂，70℃水浴提取2次，1 h/次，合并滤液，浓缩至干，临用前配成所需浓度，作为供试品溶液。 　　2.2 紫苏酚性物质的含量测定［4～6］采用FeCl3-K3Fe()6比色法，以没食子酸为标样制作标准曲线，测定紫苏中总酚酸含量；采用香草醛/硫酸比色法，以儿茶素为标样制作标准曲线，测定其原花色素含量；采用碱式铝盐比色法，以芦丁为标样制作标准曲线，测定其总黄酮含量。 　　2.3 抗氧化活性实验［7～9］ 　　2.3.1 清除自由基活力取提取物适量，加入25 μg/ml的DPPH甲醇溶液3.5 ml，快速混匀，30 min后测定在516 nm处的吸光度。 计算 DPPH清除率：清除率(%)=（1- ［DPPH］t/［DPPH］t=0）×100%。 　　其中［DPPH］t表示30 min时体系的吸光度；［DPPH］t=0表示0时刻体系的吸光度。 　　2.3.2 还原力测定取提取物适量，加入磷酸缓冲液（0.2 mol/L，pH 6.6）2.5 ml及1%铁氰化钾溶液1.5 ml，50℃保温20 min后，加入10%三氯乙酸1.5 ml，混匀后取2.5 ml，加入蒸馏水2.5 ml及0.1%三氯化铁0.3 ml。在700 nm处测定反应液吸光度值。吸光度值越大，表示还原力越强。 　　2.3.3 脂质体氧化法将大豆卵磷脂分散于去离子水中，20 kHz超声波处理30 min，周围以冰水冷却，制得大豆磷脂浓度为0.8%的人工脂质体。取20 ml脂质体，加入提取物，以10 mmol乙酸铜20 μl催化氧化反应，混匀后放置于回转式恒温水浴振荡器上，于暗处37℃、100 r/min进行开口氧化实验，每隔一定时间测定共轭二烯氢过氧化物及丙二醛生成量。 　　共轭二烯氢过氧化物(CD)的测定：取1 ml氧化液，溶于3 ml甲醇，于234 nm处测定其吸光度，以摩尔消光系数ε=26 000 L·mol-1·cm-1计算脂质体体系中共轭二烯氢过氧化物的生成量（mmol/kg卵磷脂）。 　　丙二醛（MDA）的测定：取1.5 ml氧化液，加入1 ml MDA溶液，测定在532 nm处的吸光度，以摩尔消光系数ε=1.56×105 L·mol-1·cm-1计算丙二醛的生成量（mmol/kg卵磷脂）。 　　抗氧化效果用抑制率表示：抑制率(%)=（1-处理氧化产物生成量/空白氧化产物生成量）×100% 　　结果见表1及图1～4。 　　表1 紫苏酚性物质