红树植物卤蕨内生真菌Penicillium sp. 0935030中的抗菌活性成分研究.docVIP

　　红树植物卤蕨内生真菌Penicillium sp. 0935030中的抗菌活性成分研究 作者：崔海滨 梅文莉 缪承杜 林海鹏 洪葵 戴好富 【摘要】 为研究红树林植物卤蕨(Acrostichum aureurm)内生真菌Penicillium sp.0935030发酵物中的抗菌活性成分，采用活性追踪的方法，用多种色谱技术对化合物进行分离纯化，通过理化性质和光谱数据鉴定出7个化合物，分别为：环(脯氨酸苏氨酸)(1)，环(脯氨酸酪氨酸)(2)，1呋喃基1，2乙二醇(3)，(3β，4β，22β)12烯3，22，23三羟基齐墩果烷(4)，甘露醇(5)，尿苷(6)和甘草素(7)。以上化合物均为首次从该真菌中分离得到。用滤纸片琼脂扩散法测定上述化合物的抗菌活性，其中化合物1、2和7具有明显抗金葡菌和耐甲氧西林金葡菌活性。 【关键词】 卤蕨； 内生真菌； 青霉属； 环二肽； 抗菌活性 ABSTRACT To study the antibacterial constituents from the fermentation broth of endophytic fungus Penicillium sp. 0935030 from mangrove plant Acrostichum aureurm. The separation procedure n chromatography, and thEir structures annitol (5), uridine (6), and liquiritigenin (7) by physicochemical and spectral data. All pounds this fungus for the first time. Antibacterial activities of all the pounds ethod, and pounds 1, 2, and 7 shoethicillinresistant Staphylococcus aureus. KEY RSA)，至今MRSA已成为全球 医院 感染的重要病原菌之一。MRSA具有广谱耐药性，其所致感染的 治疗 是临床十分棘手的难题，寻找有效治疗MRSA的新抗生素已经成为当今医药界的重要任务［4］。 本研究组在对红树植物共附生微生物的培养物进行生物活性筛选过程中， 发现红树林植物卤蕨(Acrostichum aureurm)内生真菌Penicillium sp.0935030的发酵液显示出抗MRSA活性。为了寻找其中的抗菌活性成分，以MRSA、金葡菌和白念珠菌为模型，在活性筛选指导下，从该发酵液的乙酸乙酯萃取物中分离得到7个化合物，经MS、NMR、1H1H COSY、HMQC和HMBC等鉴定其结构分别为：环(脯氨酸苏氨酸)(1)、环(脯氨酸酪氨酸)(2)、1呋喃基1，2乙二醇(3)、(3β，4β，22β)12烯3，22，23三羟基齐墩果烷(4)、甘露醇(5)、尿苷(6)和甘草素(7)。以上化合物均为首次从该真菌中分离得到，其中化合物1、2和7具有明显抗MRSA和金葡菌的活性(Fig.1)。 1 材料与方法 1.1 试验试剂和仪器 熔点用北京泰克仪器有限公司生产的X5型显微熔点仪测定(未校正)。旋光在JASCO20C数字旋光仪上测定；MS用VG Autospec3000型质谱仪测定；NMR用Bruker av400超导核磁仪测定，以TMS为内标；薄层层析硅胶和柱层析硅胶均为青岛海洋化工厂产品；Sephadex LH20为Merck公司产品；GJ100BE发酵罐(江苏镇江生物仪器公司)；硫酸卡那霉素(上海生工有限公司)，氟康唑(贵州科伦药业有限公司，批号A05031404)，其它试剂均为分析纯。 供试菌株MRSA ATCC9551由英国Heriot RSA和金葡菌采用牛肉膏蛋白胨培养基［5］：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂20g，定容至1L，pH7.0～7.2，121℃灭菌20min；白念珠菌采用YPD培养基［6］：葡萄糖20g，胰蛋白胨20g，酵母粉10g，琼脂20g，定容至1L，pH7.0，121℃灭菌20min。 1.2 菌株的分离与培养 (1)菌株 菌株093503分离自海南文昌清澜港红树林植物卤蕨(Acrostichum aureurm)的根，植物样品由 中国 热带农业 科学 院热带生物技术研究所代正福副研究员鉴定为卤蕨，菌株093503由中国热带农业科学院热带生物技术研究所洪葵教授研究组鉴定为青霉属，初筛具有抗MRSA活性。菌种保存于中国热带农业科学院热带生物技术研究所。 (2)培养 改良Ma