培养基制备(论文资料).ppt

培养基的制备  　 培养基是用人工的办法将细菌生长所需的营养物质按一定比例配制成的营养基质。培养基中均应含有满足微生物生长发育且比例合适的水分、碳源、氮源、无机盐、生长因素以及某些特需的微量元素外还应具有适宜的酸碱度〔pH值〕、缓冲能力、氧化还原电位和渗透压。 一、实验目的 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 。 二、实验器材 (1) 试剂：各种商品化培养基 (2)器材：量筒、烧杯、天平、药匙、玻棒、培养皿、试管、分装漏斗。 三、方法与步骤 1、营养琼脂培养基的配制 (1) 熟悉培养基说明。 (2)操作步骤： 1）称药品 。 2）加热溶解 需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。 3）过滤 液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果的观察。但是供一般使用的培养基，该步可省略。 4）分装 披实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上面造成污染。 分装量要求： a)液体分装 分装高度以试管高度的1/4左右为宜。 b）固体分装 约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面。 c）半固体分装 以试管高度的1/3为宜．灭菌后垂直待凝。 5）加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞。棉塞制作方法如 。棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约3／5塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通气，则可用8层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。 6）包扎 加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。 7）培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果和不损培养基的必要成份。培养基经灭菌后，必须放37℃培养24h做无菌检验，无菌生长者方可使用。 图 例 四、注意事项 称药品用的药匙不要混用；称完药品应及时盖紧瓶盖。不同培养基各有配制特点，要注意具体操作。 五、实验报告 记录本实验配制培养基的名称、数量，并说明其配制过程，指明要点。 分装量的要求 琼脂平板： 先将灭菌琼脂融化后冷却至50℃左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内，水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置4℃保存备用。 六、问题和思考 1．配制培养基有哪几个步骤?在操作过程中应注意些什么问题?为什么? 2．培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌?若不能及时灭菌应如何处理？已灭菌的培 养基进行无菌检查？ 消毒和灭菌  采用强烈的理化因素使任何物体内外所有的微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施称之为灭菌。灭菌是要进行微生物纯培养的需要。 实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌效果。高温主要是使微生物的蛋白质和核酸等重要生物大分子发生变性。高温灭菌分为干热灭菌和湿热灭菌两大类。湿热灭菌的效果比优于干热灭菌。湿热下热量易于传递，更容易破坏保持蛋白质稳定性的氢键等结构，加速其变性。此外，过滤除菌、射线灭菌和消毒、化学药物灭菌和消毒等也是微生物学操作中不可缺少的常用方法。 一、实验目的和内容 目的：了解消毒和灭菌的原理并掌握各种灭菌方法的操作步骤。 内容： 1．高压蒸汽灭菌法。 2．干热灭菌法。 二、实验材料和用具 待灭菌的培养基、高压蒸汽灭菌锅、过滤除菌器、培养皿、试管 三、操作步骤 高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌法适用于培养基、无菌水、工作服等物品的灭菌。 1．加水 将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，以水面与三角架相平为至。 2．装料 将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。装有培养基的容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶壁，以防冷凝水沾湿棉塞。 3．加盖 将盖上与排气孔相连接的排气软管插人内层灭菌桶的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，并打开排气阀； 4．排气 加热．待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔排出。一般认为，当水沸后约5min，表明锅内空气已排净。 5．升压 当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。 6．保压 当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源。开始计时并维持压力至所需时间。本实验用121℃，20min灭菌。 7．降压 达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下降到零后，打开排气阀。放净余下的蒸汽后，再打开锅盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。 8.灭菌后处理 需要摆斜面的趁热摆放斜面，需分装至平皿的等冷却至56℃时分装。 9．无菌检查 将已灭菌培养基于37℃培养24h，无杂菌生长