实验三培养基的制备及灭菌.ppt

实验三 培养基的制备及灭菌 一 、实验目的 1、了解培养基制备原理，学习并掌握培养 基制备方法。 2、掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌的原理和方法。 二、基本原理 （一）培养基的制备原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。 从营养角度分析： ?营养：碳源、氮源、能源、生长素、水分和无机盐等； ?适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力； ?一定的氧化还原电位； ?合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微生物污染。但多次反复融化，其凝固性降低。 （二）灭菌原理 1 干热灭菌原理 干热是指相对湿度在20％以下的高热。干热消毒灭菌是由空气导热，传热效果较慢。一般繁殖体在干热80－100℃中经1小时可以杀死，芽孢需160－170℃经2小时方可杀死。 2 湿热灭菌原理－高压蒸汽灭菌 在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 三、实验器材 1、药品? 琼脂，10％HCL，10% NaOH，牛肉膏蛋白胨培养基的配方药品。 2、材料 具刻度1000mL塘瓷量杯，天平，试管，量筒，小烧杯，玻璃棒，药匙，pH试纸，棉花，报纸，麻绳，标签，培养皿等。 3、设备 高压蒸汽灭菌锅、烘箱、冰箱、电炉等。 四、实验方法及步骤 （一）培养基的制备 牛肉膏蛋白胨培养基制备步骤： 1、称量 2、溶解 3、调pH 4、过滤 5、分装 6、加塞 7、包装 8、灭菌 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 20g 水 1000ml pH 7.0~7.2 121oC 灭菌20min 马铃薯(PDA)培养基培养(霉菌用)制备 马铃薯 200g 蒸馏水 1000mL 蔗糖 20.0g pH 自然 琼脂 20.0g 马铃薯汁制备：将马铃薯去皮，称量所需重量，切成小块,加水煮沸30min. 调节pH值 (4)过滤 用滤纸或双层纱布(中间夹一层脱脂棉花)趁热过滤。 (3)在滤液中加入琼脂，煮沸溶解后加糖（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装。 (5)分装 根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管或三角烧瓶内,包扎管(瓶)口。 注意事项！ （1）在制备固体培养基加热融化琼脂时要不断搅 拌，避免琼脂糊底烧焦。 （2）液体培养基：分装高度以试管的1/4左右为宜。 （3）固体培养基：分装试管，其装量为管高的1/6~1/5 灭菌后制成斜面。分装三角瓶容量以一半为宜 （4）半固体培养基：分装试管一般以试管高度的1/3 为宜，灭菌后，垂直待凝成半固体深层琼脂。 （5）不要使培养基沾在管口或瓶口，如沾上，需用 干净的纱布擦干净。 （二）灭菌 干热灭菌操作步骤： （1）在移液管尾部塞上少许棉花，然后用报 纸条包好；用报纸条包好干燥的培养皿。 （2）将待灭菌物品包扎好，均匀放入烘箱内， 注意不要摆的太挤，以免妨碍气流流通。 （3）开启电源，设定温度为160oC~170oC，保 持此温度1~2小时。 （4）切断电源，待温度降至70oC以下时，打 开箱门，取出灭菌物品。 湿热灭菌 湿热灭菌操作步骤： 1、灭菌物准备 （1） 培养基准备 （2） 无菌水的准备 用100ml量筒量取90ml的自来水装入250ml的带玻璃珠的三角瓶中，做好棉塞，用牛皮纸包好。 2、高压蒸汽灭菌 （1）加水： ? 将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加入适量的水，将内桶放入。（手提式锅） ? 直接加水至锅内底部隔板以下1/3处。有加水口者由加水口加入至止水线处。（立式锅） （2）装锅： 把需灭菌的器物放入锅内，关严锅盖。 （3）接通热源： 打开排气阀，待见有大量水汽排出时，维持3～5min，锅内空气排尽，关上排气阀。 （手提式锅） 先将锅盖上排气阀关闭，同时打开底部排气阀。待见有大量水汽排