第3次体外培养物的生长生物学.ppt

6)血清中含有蛋白酶抑制剂： 有些组织细胞，如内皮细胞及一些死细胞，可以释放蛋白酶而对细胞造成损害。血清中的蛋白酶抑制剂可以起到中和作用。有些情况下，血清还具有中和毒性物质保护细胞的作用。 血清在体外培养中的作用是多方面的。血清对于培养细胞的主要作用体现在以下几个方面： （2）血清在体外培养中的作用 1、血清的成分与作用 （一）营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响 三、影响动物细胞体外生长的因素 7)血清中含有pH缓冲物质： 对稳定培养液的酸碱度是有意义的。 血清在体外培养中的作用是多方面的。血清对于培养细胞的主要作用体现在以下几个方面： （2）血清在体外培养中的作用 1、血清的成分与作用 （一）营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响 三、影响动物细胞体外生长的因素 但是，培养液中添加血清也有诸多缺点： （1）对于大多数动物细胞来讲，血清并不是细胞在体时直接接触的生理性液体，只有在伤口愈合以及血液凝固过程中才接触血清，此时血清对成纤维细胞的生长有促进作用而对表皮细胞的生长有抑制作用； （2）血清在体外培养中的作用 1、血清的成分与作用 （一）营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响 三、影响动物细胞体外生长的因素 （2）血清也具有潜在的细胞毒作用，除了特异性抑制成分、细菌毒素以及脂类成分之外，还含有多胺氧化酶。后者能与来自增殖活跃的细胞的多胺（如精胺、亚精胺）起反应，形成有细胞毒作用的聚胺醛。 现已证明胎牛血清中多胺氧化酶的含量远比马血清中的要高。 但是，培养液中添加血清也有诸多缺点： （2）血清在体外培养中的作用 1、血清的成分与作用 （一）营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响 三、影响动物细胞体外生长的因素 （3）血清的个体差异大，需要分批筛选。而且永远不可能保持批次间的一致； （4）在培养液中使用血清会增加成本，尤其是对于动物细胞的大规模培养以及使用胎牛血清培养的情况更是如此； 但是，培养液中添加血清也有诸多缺点： （2）血清在体外培养中的作用 1、血清的成分与作用 （一）营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响 三、影响动物细胞体外生长的因素 （5）血清中有时所含的生长因子水平不足而需要补充，若补充过量会抑制细胞生长。 培养批次与血清批次不同，生长因子水平是难以控制的。 但是，培养液中添加血清也有诸多缺点： （2）血清在体外培养中的作用 1、血清的成分与作用 （一）营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响 三、影响动物细胞体外生长的因素 常规动物细胞培养离不了血清，但又需避免血清的不良影响。 建议使用低血清与无血清培养液，这样可以尽量使培养条件标准化、实验重复性提高、减少成本、减少血清有害成分的影响、降低生化分析中蛋白质成分的干扰、防止原代培养过程中成纤维细胞的过度增长。 （2）血清在体外培养中的作用 1、血清的成分与作用 （一）营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响 三、影响动物细胞体外生长的因素 2、无血清培养液的设计及应用 一般情况下，多数学者将无血清培养基（液）　（serum-free medium，SFM）也称为化学限定性培养基或化学成分明确的培养基(chemically defined medium），但严格来讲，无血清培养基（液）并不是“化学成分明确”的同义词。 “无血清”仅代表培养液中未补加血清。 （一）营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响 三、影响动物细胞体外生长的因素 （1）培养基选择的一般考虑 首先要明确所要培养的细胞类型： *是寿命有限的正常二倍体细胞，还是已发生转化的细胞，或者是具有永生性的恶性细胞。 *是同质种群（同一细胞系、株）还是异质种群（不同细胞成分混杂）。 迄今已开发的合成培养基很多，到底选用哪一种才适合所要培养的细胞？ 2、无血清培养液的设计及应用 （一）营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响 三、影响动物细胞体外生长的因素 其次要确定培养的目的：是维持细胞的生存（保持分化特征）；还是要使得细胞大量增生。 最后要确定：是否补加血清；以及补加的血清的最低限量。 迄今已开发的合成培养基很多，到底选用哪一种才适合所要培养的细胞？ （1）培养基选择的一般考虑 2、无血清培养液的设计及应用 （一）营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响 三、影响动物细胞体外生长的因素 （2）使培养细胞适应无血清培养液的基本策略 培养细胞从含血清培养液转入无血清培养液必然有一个适应期，且因细胞类型不同长短各异。 虽然某些转化细胞转入无血清培养液中生长，在接种后潜伏期没有延长，但绝大多数细胞的活力降低。 从有血清培养液换成无血清培养液，一定要缓慢逐渐进行，并密切注意监测培养细胞的生长状况，随时对新培养液配方作出调整。 2、无血清培养液的设计及应用 （一）营养成分与生长基质成分对细胞生长的影响 三、影响动物细胞体外