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色谱指纹图谱分析技术用于鉴别中药玄参产地的研究.doc
色谱指纹图谱分析技术用于鉴别中药玄参产地的研究
作者:马登峰 周浓 白志川 房立晶 孙婵娟
【摘要】 目的采用高效液相色谱(HPLC)色谱指纹图谱分析技术鉴别中药玄参产地。方法采用HPLC法测定了重庆市武隆县玄参等14个不同产地玄参样品。色谱条件C18柱,甲醇-1%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长290 nm,体积流量1.0 ml/min,柱温30℃。结果对重庆市武隆县10批次玄参样品的多个活性成分进行综合评价,筛选出重庆市道地药材玄参为建模对象,合成出玄参的标准HPLC色谱指纹图谱模型;并用此模型和特征成分的相对峰面积比值准确地区分浙江省磐安县等不同产地玄参。结论研究将有助于玄参药材的标准化种植及质量控制。
【关键词】 玄参 肉桂酸 高效液相色谱法 指纹图谱 质量控制
Abstract:ObjectiveTo identify the Habital of Radix Scrophulariae atographic Fingerprinting.MethodsActive constituents ten batches of sample of Radix Scrophulariae (Scrophularia ningpoensis Hemsl.), Chongqing C18 column ethanol-1% glacial acetic acid as mobile phase, the detection , the flol·min-1, and column temperature ten batches of sample of Radix Scrophulariae (Scrophularia ningpoensis Hemsl.), Chongqing C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)(美国迪马公司);流动相:甲醇-1%冰醋酸,流动相A为甲醇,流动相B为1%冰醋酸水溶液。检测波长290 nm,柱温30 ℃,流速1.0 ml/min,进样量20 μl。理论塔板数按肉桂酸峰 计算 不低于2 000,与其它峰的分离度均大于1.0,所有组分均在50 min内被检测完。见表2。表2 指纹图谱流动相线性梯度表
1.5 对照品溶液的制备精密称取肉桂酸对照品适量,加甲醇制成每毫升含50.0 μg的溶液,即得。
1.6 供试品溶液的制备取玄参药材粉末(过50目筛)约1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇30 ml,密塞,称定重量,浸泡1 h后,超声处理(功率250 in,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
1.7 方法学考察
1.7.1 稳定性实验取同一批次供试品(样品号:8),在室温下放置,分别于0,2,4,6,8,10,12,24,36,48 h检测指纹图谱。用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算,结果表明,在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为0.999 7,0.999 8,0.999 5,0.999 7,0.999 6,满足相似度不小于0.950的要求,各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化,RSD分别为0.00%~0.28%和0.00%~2.95%,RSD<3.00%,各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间±1 min内,符合指纹图谱要求。说明供试品溶液的成分在48 h内是稳定的。
1.7.2 精密度实验取同一批次供试品(样品号:8),连续进样5次,记录指纹图谱。用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算,结果表明,在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为0.999 2,0.999 8,0.999 6,0.999 7,0.999 8,满足相似度不小于0.950的要求,各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化,RSD分别为0.00%~0.34%和0.00%~2.85%,RSD<3.00%,各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间±1 min内,符合指纹图谱要求。说明仪器的精密度良好。
1.7.3 重复性实验取同一批次样品(样品号:3),按供试品溶液的制备方法分别制备5份供试品,记录指纹图谱。用“中药指纹图谱相似度计算软件”计算,结果表明,在同一台仪器测得的色谱指纹图谱的相似度分别为0.999 9,0.999 2,0.999 6,0.999 8,0.999 3,满足相似度不小于0.950的要求,各主要色谱峰相对保留时间和其相对峰面积比值无明显变化,RSD分别为0.00%~0.34%和0.00%~2.84%,RSD<3.00%,各色谱峰的相对保留时间在平均保留时间±1 min内,符合指纹图谱要求。说明该实验方法的重复性较好。
2 结果
2.1 供试品测定同一上述实验条件下,连续测
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