虫草胞外多糖延缓果蝇衰老暨减轻香烟毒害作用的研究.docVIP

　　虫草胞外多糖延缓果蝇衰老暨减轻香烟毒害作用的研究 【摘要】 目的 观察喂食不同剂量虫草胞外多糖果蝇在正常环境和香烟污染环境下生存情况。方法 在基础培养基中分别添加1.5%、1.0%和0.5%的虫草多糖喂食果蝇，将果蝇置26℃正常环境和有香烟污染的生长培养箱中培养。结果 正常环境下，虫草多糖大、中、小3个剂量组分别能使雄性果蝇寿命率延长38.0%、26.0%、23.6%；雌果蝇寿命延长率为45.9%、41.8%、36.6%，效果极显著(均P＜0.01)。香烟污染使果蝇寿命大幅度减短，虫草多糖能使污染环境中的雌、雄果蝇寿命较大幅度提高，延长率为24.0% ～49.80%，同样也具有极显著效应(均P＜0.01)。大、中剂量多糖均能使香烟污染的雄性果蝇寿命超过正常环境的存活时间，但大剂量多糖也无法使雌性果蝇存活时间达到无香烟污染的平均寿命。结论 虫草胞外多糖具有显著延长果蝇寿命作用，同时对减轻香烟毒害、延长果蝇寿命也有一定的功效，对雄性果蝇作用尤为显著。 【关键词】 果蝇；虫草胞外多糖；香烟污染；延缓衰老 众所周知，食用菌多糖具有多种生理功能，其中虫草多糖有很强的过氧化物和羟基自由基清除能力，使细胞的各种生理、生化代谢机制能顺利进行，延缓机体衰老；活性多糖还具有提高免疫力、抗免疫损伤性大鼠肝纤维化、抗肿瘤及降糖等功效〔1～4〕。然而在诸多功效中，有关抗香烟毒害作用的研究未见报道。本实验在香烟污染环境下，以果蝇寿命为指标，探究虫草多糖抗香烟毒害和延缓衰老的作用。 　 　1 材料与方法 　　1.1 实验动物与供试菌株 　　黑腹果蝇(Drosophila melanogaster),由福建师范大学生命 科学 学院遗传学室提供。冬虫夏草（Cordyceps sinensis）无性型菌丝体试管菌种由福建师范大学生命科学学院微生物室保存。 　　1.2 虫草胞外多糖的制备 　　将虫草无性型菌丝体一级摇瓶种子液接种到含有蛋白胨2％、蔗糖4％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁 0.5％液体培养基中，24℃ 、180 r/min摇瓶培养7 d，离心得上清发酵液。将发酵液浓缩10倍，采用sevag法除蛋白后，将所得浓缩液与80%乙醇以体积比1∶3比例混合，振荡摇匀，4℃静止12 h，弃去上清液，沉淀物即为胞外粗多糖。将粗多糖50℃烘干并研磨成粉状，保存备用。 　　1.3 果蝇培养基 　　基础对照培养基：将玉米粉120 g、蔗糖100 g、酵母粉10 g、琼脂21 g、蒸馏水2 000 ml煮沸至约2 000 ml，加入丙酸15 ml〔5，6〕，作为对照组Ⅰ和对照组Ⅱ的果蝇饲养。实验培养基：在基础对照培养基里分别添加1.5%、1.0%、0.5%虫草粗多糖，制备成大、中、小3个不同剂量，装于150 ml三角瓶，4层纱布封口，用于饲养果蝇，进行抗香烟污染与延缓衰老实验。 　　1.4 果蝇饲养 　　收集8 h内羽化未交配的大量雌雄果蝇,用乙醚麻醉，分组实验。 无污染实验分为4组：即对照组Ⅰ（基础对照培养基）和虫草多糖大、中、小3个剂量组、雌雄分开，每组果蝇100只,置于生化培养箱中（26±1）℃培养，6 d更换1次培养基。 香烟污染实验分为4组：即对照组Ⅱ（基础对照培养基）和虫草多糖大、中、小3个剂量组，雌雄分开，每组果蝇100只，置(26±1)℃生化培养箱中培养。每天在培养箱点燃4支香烟，香烟点然后6 h打开培养箱，统计果蝇生存数和死亡数。每隔6 d更换1次培养基。 每天定时观察记录果蝇生存数和死亡数，至果蝇全部死亡。 计算 出平均寿命、最高寿命（最后死亡的10只果蝇平均寿命）和延长寿命率（以平均寿命计算）。 延长寿命率（%）=实验组平均寿命-对照组平均寿命对照组平均寿命 　　1.5 统计学方法 　　采用SPSS软件做方差分析。 　　 2 结 果 　　2.1 虫草胞外粗多糖对雌、雄性果蝇寿命的影响 　　见表1、表2。添加虫草多糖均能显著延长雌、雄性果蝇的平均寿命(Plt;0.01)，且这种延长作用与虫草多糖浓度呈正相关，即随着多糖浓度增大，延缓衰老效果愈显著。虫草多糖对果蝇寿命延长效果呈现性别差异，其对雌性果蝇寿命的延缓作用明显优于雄性（Plt;0.01）。尤其是添加1.0%和0.5%中、低剂量的虫草多糖，雌性果蝇寿命延长率比雄性的寿命延长率高出15.8%和13.0%。 表1 虫草胞外多糖对雄性果蝇寿命的影响(略)表2 虫草胞外多糖对雌性果蝇寿命的影响(略) 　　2.2 香烟污染条件下虫草胞外粗多糖对果蝇寿命的影响 　　见表3、表4。香烟毒害作用使雌性果蝇平均寿命从（39.7±11.4）d降至（27.9±8.8）d，雄性果蝇平均寿命从（38.4±11.1）d降至（29.5±9.2）d，说明香烟对果蝇毒害作用很大，使雌、雄果蝇寿命均大幅