源于博伊丁假丝酵母的甲酸脱氢酶的分离纯化与反应机制.pdfVIP

学兔兔 化 工 进 展 ·l8O8· CHEMICAL lNDUSn AND ENGINEERING PR0GRESS 2o09年第28卷第10期 源于博伊丁假丝酵母的甲酸脱氢酶的分离纯化与反应机制 彭益强，方柏山 (工业生物技术高等学校重点实验室 华侨大学，福建 厦门361O21) 摘 要：使用两步发酵法培养博伊丁假丝酵母( 6D ff)，菌株细胞经破碎与分离所得粗酶波经DEAE SepHaroses Fast Flow层析快速纯化获得NAD 依赖型的甲酸脱氢酶，酶的比活从0．83 U／mg提高到2．67 U，mg，纯 化倍数和回收率分别为3．22倍和29．7％。研究了从反应物消耗到产物生成之间的酶反应历程，确定了甲酸脱氢酶 的酶促反应为有序BiBi反应机制，其中NAD 是第一底物，Hc0oNa是第二底物，NADH是首先释放的第一产 物，Hc03 是随后释放的第二产物；二次作图法求解出 ax、 sl、 s2、 sl等动力学参数，确定甲酸脱氢酶有 序BiBi反应速度方程为～ 23xl 】 。 一 1． ×1 +lI9l×l + 】】 关键词：甲酸脱氢酶；反应动力学；辅酶再生 中图分类号：TQ 923 文献标识码：A 文章编号：lo0O一6613(2o09)l0一l808—07 Purificati0n and enzymatic catalysis mechanism 0f f0rmate dehydrOgenase frOm C ，l Z 6 PENG jqinng，FANG Bdishcm (Key Laborator)，f0r Industrial Biotecl1Ilology ofFujiaI1 Higl1er Education，Hua Qia0 Universi xi锄en 361O2l， FujiarI，China) Abstract：NAD。d印ended fonnate dehydrogenase(FaleDH)f-r0m C d 6D ，zff waS purified by diethylamiI1oethyl(DEAE)Sephar0ses Fast Flow chromatography after tlle strain w暑Ls cultured by 。一step fe衄 entation and cmde ceU extract was obtained by crushing and separation．The eIlzylne specific activity increased f．r0m 0．83 U／mg to 2．67 U／mg and a 3．22 fold purification was achieved with the recOVery 0f 29．7％activity．The ordered BiBi reactiOn mechanism Of FateDH em：ymatic reactiOn was cOnf