Development of a PNA Probe for Fluorescence In Situ Hybridization Detection of Prorocentrum donghaiense 英文参考文献.docVIP

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2017-05-11 发布于上海
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Development of a PNA Probe for Fluorescence In Situ Hybridization Detection of Prorocentrum donghaiense 英文参考文献.doc

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Development of a PNA Probe for Fluorescence In Situ Hybridization Detection of Prorocentrum donghaiense 英文参考文献

DevelopmentofaPNAProbeforFluorescenceInSitu HybridizationDetectionofProrocentrumdonghaiense GuofuChen1,2,4,ChunyuZhang1*,BaoyuZhang2*,GuangceWang2,3*,DoudingLu5,ZhongXu1 ,Peishen Yan1 1State Key Laboratory of Urban Water Resource and Environment, Harbin Institute of Technology, Harbin, China, 2Tianjin Key Laboratory of Marine Resources and Chemistry,TianjinUniversityofScienceandTechnology,Tianjin,China,3InstituteofOceanology,ChineseAcademyofSciences,Qingdao,China,4TheFirstInstituteof Oceanography,SOA,Qingdao,China,5TheSecondInstituteofOceanography,SOA,Hangzhou,China Abstract Prorocentrumdonghaienseisacommonbutdominantharmfulalgalbloom(HAB)species,whichiswidelydistributedalong the China Sea coast. Development of methods for rapid and precise identification and quantification is prerequisite for early-stagewarningandmonitoringofbloomsduetoP.donghaiense.Inthisstudy,sequencesrepresentingthepartiallarge subunit rDNA (D1–D2), small subunit rDNA and internal transcribed spacer region (ITS-1, 5.8S rDNA and ITS-2) of P. donghaiensewerefirstlyobtained,andthensevencandidateDNAprobesweredesignedforperformingfluorescenceinsitu hybridization(FISH)testsonP.donghaiense.BasedonthefluorescentintensityofP.donghaiensecellslabeledbytheDNA probes,theprobeDP0443Adisplayedthebesthybridizationperformance.Therefore,aPNAprobe(PP0443A)analogousto DP0443Awasusedinthefurtherstudy.ThecellslabeledwiththePNAprobedisplayedmoreintensivegreenfluorescence thanthatlabeledwithitsDNAanalog.ThePNAprobewasusedtohybridizewiththirteenmicroalgaebelongingtofive families, i.e., Dinophyceae, Prymnesiophyceae, Raphidophyceae, Chlorophyceae and Bacillariophyceae, and showed no visible cross-reaction. Finally, FISH with the probes PP0443A and DP0443A and light microscopy (LM) analysis aiming at enumeratingP.donghaiensecellswereperformedonthefieldsamples.Statisticalcomparisonsofthecelldensities(cells/L) ofP.donghaienseinthenaturalsamplesdeterminedbyFISHandLMwereperformedusingone-wayANOVAandDuncan’s multiplecompari