国立中兴大学食品暨应用生物科技学系103学年度第一学期硕士在职专班.doc

題目：Metabolic activity and symbiotic interactions of lactic acid bacteria and yeasts isolated form water kefir 從水克弗中分離自乳酸桿菌和酵母之代謝活性及相互共生 演講者：(學號：5103043018) 主持人：指導教授： 老師 演講日期及時間(順序)：20/12/14 (No.13) 摘要 水克弗是一種共培養發酵穩定稍具有酸度及微含酒精成分的乳類飲料。其高糖含量和低的氨基酸濃度表示水克弗的培養環境是條件嚴苛的。在這樣的生態環境唯一的要件是要有條件適合的微生物在該培養環境都能夠生長和相互提供必需營養成分。共培養環境系統中研究到主要代表水克弗酵母菌和乳酸菌之間的協同作用。共培養的酵母和乳酸菌在水克弗介質中顯著增加產量的所有合作因子的互動，確定水克弗菌株互利共生的交互作用。Zygotorulaspora (Z.) florentina?的必需營養素是由乳酸菌提供，培養基的酸化是使受影響的酵母製造的必需營養素讓乳酸菌改良生長。Lactobacillus (Lb.) hordei與酵母的營養相互作用成了從酵母菌、氨基酸和維生素 B6 的釋放而Lb. nagelii 使他們生產的氨基酸產量增加。Z.?florentina 與Lb. nagelii?的相互作用再進一步的測試，顯示共培養誘導酵母釋放精氨酸，這是Lb. nagelii. 的主要功能。 材料與方法 （一）材料： 一般材料：water kfeir益生菌、MRS、YPG、0.2μm濾材、指示劑 微生物：Lactobacillus (Lb.) hordei TMW 1.1822. Lactobacillus (Lb.) nagelii TMW 1.1825. Zygotorulaspora (Z.) florentina TMW 3.220. Saccharomyces.﹙S.﹚ cerevisiae TMW 3.221. （二）方法： 1.以改良的MRS培養基做乳酸桿菌的預培養，酵母菌在YPG培養基中培養（Gulitz et al.2011）。隔夜培養、離心，將樣品懸浮於Ringer試劑中，取樣範圍分別為109 cfu/ml乳酸桿菌和108 cfu/ml的酵母菌。 2.共培養實驗是以每個生物體單獨培養在6孔板(組織培養板)上並做一個空白測試確認為無菌的條件，將乳酸桿菌和酵母菌之間的每個可能性組合均進行測試。 3鹽酸從pH8.0、7.0、6.0、5.0、4、0和3.0測試YPG對pH值不同之改變找出最適合pH。 4.簡化化學成分確定的培養基 (SCDM）確定了水克弗菌株的必需營養素，以葡萄糖作為碳源。省略培養基生長速度的比較，以無菌石蠟油作厭氧隔離。 5.乳酸桿菌和酵母菌另外單獨接種在個別培養基作為與（SCDM）之比較。 6. WKM 補充了所有必需的營養素给Lb. hordei和Lb. nagelii，分別在兩種不同濃度 （氨基酸0.01和0.05克/100毫升；吡哆醛0.2和1.0毫克/100毫升) 在20到40小時的發酵後和純WKM相比，確定在這些介質中這兩種乳酸桿菌的生長。 結果與討論 1、研究結果說明未經隔離 細胞-細胞的接觸單就水克弗之間的代謝交互作用進行各共同培養酵母菌和乳酸桿菌測試結果顯示，乳酸桿菌表現出對於兩種酵母菌在生長上呈現正面的表現。 2. 共培養實驗模型系統中水克弗菌株單一代謝相互作用在無分泌系統中研究了 cell-cell 聯繫。每個共培養的酵母和乳酸菌進行測試，表現出共同培養的生長條件比單一栽培的菌株個體的產量明顯增加。 3. 為確定培養環境對酵母的影響，比較了不同起始 pH 值的生長現象。Z.florentina 在培養 72 小時後表現其最佳生長現象，菌體之最適生長的起始 pH 值為 4， S. cerevisiae不受培養基酸化的影響。 4. 水克弗菌以31.3％ 與 22.7%的方式將水克弗搭新的配方確定比例將Lb. hordei 和 Lb. nagelii兩株乳酸菌成為優勢菌。作為主要酵母菌的菌株分別是Z.?florentina?. 和S.?cerevisiae?。這些明顯的關鍵成分，在水克弗中這項研究被用於交互實驗。酵母比例 10%是以平均活細胞計數每克水克弗粒 。 5. 作者確定在每個共培養實驗中，都以兩組相互共生的樣本跟單一的純培養的細胞比較產量，增加的水克弗株從發酵開始，已確定在一定條件的培養環境下這些水克弗菌株的互惠共