如何提高临床标本中抗酸杆菌的阳性率2016远程教育重点分析.ppt

三、如何提高血性穿刺液的涂片阳性率 5. 加2-3滴蒸馏水或生理盐水将沉淀混匀， 6.取50-100μl涂片，备染色用。 注： 若沉淀呈褐色，再加溶痰剂5ml,消化至透明澄清，离心，弃上清，加入1-2滴(1:15)血浆，涂片。 比较浓的血性穿刺液初次消化，不推荐用溶痰剂。 稀薄穿刺液消化、中和、离心后，沉淀可直接涂片 四、如何提高尿标本中抗酸杆菌涂片的阳性率 尿液NAOH处理 先将尿液3000g-3800g ，离心15min，弃去上清液， 加入1-2倍体积的2%-4%NAOH消化至透明，加蒸馏水或无菌PBS（pH6.8）至50ml， 3000g-3800g，离心15min，弃去上清液， 加入3滴PBS或蒸馏水，将沉淀部分混合均匀， 取50-100μl涂片，备染色用。 关键点 1、如沉淀很多，建议用溶痰剂处理，最后加1:15的血浆1-2滴，吹打均匀后涂片。 2、尿标本不经消化处理，直接离心沉淀涂片，染色过程中标本易从玻片上脱落，是造成涂片阳性率降低的原因。 3、推荐荧光染色，LED显微镜镜检。 五、如何提高粪便中抗酸杆菌涂片的阳性率 溶痰剂处理或NAOH处理 将标本与5-10ml贝索溶痰剂，充分振荡使之成为混悬液， 吸取上清， 3000g-3800g ，离心15min， 弃去上清液，加1-2滴1:15血浆将沉淀混合均匀， 取50μl涂片，备染色用。 推荐粪便用2%-4%NAOH处理，荧光染色镜检。 普通荧光显微镜 每天可检查至少60个涂片 节省人力时间，因其可将视野再放大4倍 染色不需要加热 与ZN相比阳性发现率平均增加10% 可免除镜头油 可帮助早期诊断肺结核 – 即使菌浓度较低 对HIV阳性患者更灵敏 与ZN相比不会产生更多的假阳性 局限性 单位花费和保养成本较高 高压灯寿命有限（100-200小时） 需要暗室 处置与保养需要较高的技术 需要连续供电。 优越性 LED显微镜与传统荧光显微镜 荧光染色镜检 荧光染色判断标准 荧光染色结果判断： 抗酸杆菌在暗色背景下会发出黄绿色荧光，呈杆状、分枝状、V形、串珠状等，菌体细长。 结果报告方式（20×物镜、10×目镜） 荧光染色抗酸杆菌阴性（—）：0条/50视野。 报告荧光染色抗酸杆菌数：1-9条/50视野。 荧光染色抗酸杆菌阳性（1+）：10-99条/50视野。 荧光染色抗酸杆菌阳性（2+）：1-9条/视野。 荧光染色抗酸杆菌阳性（3+）：10-99条/视野。 荧光染色抗酸杆菌阳性（4+）：≥100条/视野。 荧光染色镜检中需要注意的问题 脱色时间过长背景过暗，影响镜检，脱色时间过短荧光染料脱色不完全，容易造成假阳性。 对于某些长期服用胺硫脲的病人，其分枝杆菌的抗酸性被破坏，但荧光染色性仍保留 ，因而在抗酸染色法中为阴性结果，而在金胺0法中仍呈阳性。 3. 荧光染色镜检时应认真观察抗酸杆菌的形态，应具备抗酸染色工作经验后方可进行，切勿过读。 4. 对于难以在4O倍背景下判别的抗酸杆菌，应利用100倍油镜下进行观察与确认，以免造成漏诊与误诊的情况。 5、约10%的NTM荧光染色阴性，而抗酸染色阳性，需加做抗酸染色。 荧光法与传统抗酸法 普通光学显微镜与荧光显微镜检查的敏感性和特异性 Test characteristics for Z-N and FM microscopy stratified for HIV, using culture as gold standard (n=339) Sensitivity % (95% CI) Specificity % (95% CI) HIV – negative ZN-positive 57 (50-64) 98 (97-100) FM-positive 84 (79-89) 98 (95-100) Kivihya-Ndugga LEA, et al. Int J Tuberc Lung Dis, 7(12):1163- 71, 2003 HIV – positive： Sensitivity Specificity ZN-positive 36 (28-44) 100 (100-100) FM-positive 73 (65-80) 100 (100-100) 荧光染色及抗酸染色阳性差异 直接涂片荧光染色镜检阳性率，接近浓缩后抗酸染色镜检结果 同一标本荧光染色3+，抗酸染色1+-2+ 荧光染色2+，抗酸染色1+以下 强烈推荐荧光染色方法 常用标本处理及涂片方法 直接涂片法：痰、脓液、穿刺液 漂浮集菌法：高压→二甲苯/汽油→涂片（很少用于临床） 离心沉淀法 消化离心沉淀法： 次氯酸钠处理（溶痰剂） NAOH处理 阳性率：