羊球虫病诊断技术规程.doc.doc

羊球虫病诊断技术规程 1　范围 本标准规定了羊球虫病的病原检查、病理检查与结果判定。 本标准适用于我省羊球虫病的诊断。 2　病原检查 2.1　材料准备 2.1.1　饱和食盐水溶液、0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）。 2.1.2　显微镜、麦克马斯特计数板、离心机、电子天平、50mL离心管、玻璃棒、 60目铜筛、尼龙网、50mL烧杯、100 mL量杯、载玻片、盖玻片、吸管、手术刀、解剖刀等。 2.2　粪样检查 2.2.1　清晨从疑似球虫感染的待检羊直肠中采取新鲜粪样（10～30）g，放干净容器内冷藏备用。每份粪样应附送粪卡，送粪卡应记录羊场名称、畜别、畜号、性别、年龄、有无孕、采粪日期等。送检验室待检。 2.2.2　取粪样3g，置于50mL的烧杯中，加入少量清水，用玻璃棒将粪样捣碎，加入约为粪样10倍量的清水，搅拌均匀，用60目铜筛过滤于另一干净烧杯内， 将过滤好的滤液分别加入50mL离心管中，2000r/min离心10min，倾去上清液，在沉淀物中加入饱和食盐水溶液至45mL，混匀，2000r/min离心10min。将上清液分装至四个（10～15）mL的试管中，加饱和食盐水溶液至液面微高出管口，取盖玻片轻压于液面，静置10 min。将盖玻片垂直提起，放在载玻片上，置于显微镜下检查。 2.3　病变部位检查 解剖疑似球虫感染的病、死羊，分别对羊的皱胃、肠道、肝脏及胆管等有明显病变的部位取样，进行裂殖子或卵囊检查。 2.3.1　裂殖子检查 取皱胃、肠道、胆管病变部位，用0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）轻轻洗去表层杂物。用解剖刀或手术刀刮取少许病变处粘膜，置于干净载玻片上，滴（1～2）滴0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4），加盖玻片，置于显微镜下检查。 2.3.2　卵囊检查 2.3.2.1　将病变的皱胃、肠道、胆管或胆囊，纵向剪开。取少量内容物，置于载玻片上，滴（1～2）滴0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4），加盖玻片，轻轻将内容物压散，置显微镜下检查；从有黄白色坏死灶的肝脏上，剪取少量病变组织，放研钵内，加适量0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4），充分研磨。取1滴研磨液滴在载玻片上，加盖玻片，在显微镜下检查。 2.3.2.2　羊球虫卵囊形态特征参见附录A。 2.4　卵囊计数 对检查发现羊球虫的粪样，应进行定量检查。取待检粪样2g，放入50 mL烧杯。加入少量清水搅匀，经60目铜筛或尼龙网过滤，并用清水冲洗几次滤网。滤液经2 000 r/min离心10 min。 倾去上清液，用少量饱和食盐水溶液将沉淀物搅匀，移入100 mL量杯，加饱和食盐水溶液至50 mL处，充分混匀。用吸管吸取混悬液注满麦克马斯特计数板，静置5 min，在显微镜下检查，数出每个计数室内的所有卵囊数，计算出平均值A。对压线的卵囊，按左、上压线计，右、下压线不计处理。 2.4.1　每克粪样卵囊数(OPG)按公式计算:OPG =(A÷0.15 )×60÷2=A×200 2.4.2　对卵囊数较多的粪样，可在50mL的基础上，用饱和食盐水溶液再稀释B倍后计数，则OPG按公式计算:OPG = A×200×B 2.5　检查结果 在显微镜下观察是否有球虫卵囊、裂殖体和裂殖子。 3　病理检查 3.1　病变检查 3.1.1　切开腹腔，分别对羊的皱胃、小肠两端用实线进行双重结扎，取出全部小肠及皱胃。用剪刀纵向剪开小肠及皱胃，除去内容物，用0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）冲洗肠壁和胃壁。观察胃壁及肠壁病变情况，并做好记录。 3.1.2　切开腹腔，切断肝叶周围韧带，结扎血管。取出完整肝脏及胆囊。剪开胆囊壁及胆管，用0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）清洗肝脏表面及胆囊，观察病变情况并做好记录。 3.2　检查结果 3.3.1 皱胃病变：皱胃胃壁呈弥漫性增厚并伴有水肿，胃粘膜表面有白色结节和红黑色出血斑。 3.3.2 肠道病变：十二指肠和回肠有卡他性炎症，有点状或带状出血，小肠及大肠的浆膜和粘膜上有溃疡灶，并伴有黄白色结节突出于粘膜表面。 3.3.3 肝脏及胆囊、胆管病变：肝脏表面有大量不规则黄白色坏死灶，胆囊壁增厚，胆管明显可见，管壁增厚。 4　结果判定 4.1　病原检查如见有大量球虫卵囊、裂殖体、裂殖子，病理检查出现一处或多处相应病变即判可 为羊球虫病阳性。当OPG＞10×104，判定为严重感染;当10 ×104≥OPG≥1×104，判定为中度感染；当OPG＜1×104，判定为轻度感染。 4.2　粪样一样3检，均未发现球虫卵囊；肠道、肝脏、胆囊及胆管检查未发现球虫卵囊、裂殖子，各部位均未出