荧光分析技术与应用.ppt

荧光分析法（Fluorometry) 荧光分析法（Fluorometry) 一、概述 1、荧光（Fluorescence) 一、概述 2、荧光分析法（Fluorometry) 一、概述 3、荧光分析法与 紫外－可见分光光度法和红外光谱法的比较： 荧光分析法（Fluorometry) 二、基本原理 1、分子荧光光谱的产生 二、基本原理 二、基本原理 二、基本原理 二、基本原理 二、基本原理 二、基本原理 迟滞荧光:处于激发三线态的某些分子还可以通过又一次 体系间跨越回到激发单线态,继而再发射荧光 回到基态。 在室温下，磷光一般不易呈现，若要测磷光应在低 温下，仪器应有低温设施。 2、激发光谱与荧光光谱： 光源 单色器Ⅰ 样品池 It F 单色器Ⅱ 检测器 记录 二、基本原理 二、基本原理 二、基本原理 二、基本原理 二、基本原理 二、基本原理 3、分子结构与荧光的关系 3、分子结构与荧光的关系 3、分子结构与荧光的关系 3、分子结构与荧光的关系 3、分子结构与荧光的关系 4、影响荧光强度的外部因素 4、影响荧光强度的外部因素 荧光分析法（Fluorometry) 1、荧光强度与荧光物质浓度的关系 2、定量分析方法 荧光分析法（Fluorometry) 1、荧光仪器简介 2、荧光分析新技术 荧光分析法（Fluorometry) 1、掌握去活化的几条途径是什么？有何区别？熟悉三重态、单重态概念。 2、掌握荧光、磷光定义, 成因及它们的区别。 3、掌握φf概念。 4、熟悉激发光谱、荧光光谱定义及荧光光谱的特点。 5、知道如何找λex、λem? 6、了解Raman光、Reyleigh光定义及影响。 7、分子吸收光谱与荧光光谱区别（一般了解）。 8、 F=KC使用范围Ecl≤0.05（了解）。 9、了解影响荧光强度的因素。 10、仪器部件、两种仪器区别（熟悉或了解）。 作业：复习基本理论 主要是b由于空间位阻效应使分子发生扭曲，两个苯环不能共平面，从而使荧光大大减弱。 3、分子结构与荧光的关系 a.1-二甲胺基萘-7-磺酸钠φf=0.75 b.1-二甲胺基萘-8-磺酸钠φf=0.03 SO 3 Na N C H 3 C H 3 反式强荧光 顺式无荧光 对于顺反异构体，顺式分子的两个基团在同一侧，由于空间位阻原因使分子不能共平面而没有荧光。 3、分子结构与荧光的关系 ★.取代基的作用。 ①.给电子基团能增加分子的电子共轭程度，使荧光效率提高，荧光波长长移。 例如：-NH2、-OH、-OCH3、-NHR、-NR2、-CN等 20 280~390 C6H5CN 苯基氰 20 285~245 C6H5OCH3 苯基醚 10 270~310 C6H6 苯 18 285~365 C6H5OH 苯酚 20 310~405 C6H5NH2 苯胺 荧光相对强度 荧光波长/nm 分子式 化合物 取代基对苯荧光的影响（乙醇溶液） 3、分子结构与荧光的关系 ②.吸电子基团会妨碍分子的电子共轭性，使荧光减弱甚至熄灭。 例如：-COOH、-NO2、-C=O、-NO、-SH、-NHCOCH3、-F、-Cl、-Br、-I等 注意：卤素取代基会随着原子序数的增加而减少荧光效率，这可能是由于重原子效应。 有荧光 无荧光 3、分子结构与荧光的关系 ③.对电子共轭体系作用较小的取代基对荧光的影响不明显。 例如：-R、-SO3H、-NH3+等 3、分子结构与荧光的关系 a、温度 温度越高，荧光效率越小；反之，温度越低，荧光效率越大。 原因：温度升高，分子运动加快，磁撞几率增大,无辐射跃迁几率增大。 荧光量子产率与温度的关系 （A.罗丹明B的甘油溶液；B.硫酸铀酰的硫酸溶液） b、溶剂 ★.溶剂介电常数增大，极性增大, n→π*的ΔE增大,φ减小,λ减小；π→π* 的ΔE 减小,φf增大，λ增大。 ★.溶剂含