原发性肝癌细胞中Rock2调控CEBPD对其增殖功能的作用.pdfVIP

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2017-05-13 发布于上海
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原发性肝癌细胞中Rock2调控CEBPD对其增殖功能的作用.pdf

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原发性肝癌细胞中Rock2调控CEBPD对其增殖功能的作用

Abstract CEBPD expresshon. Key words ：Rho associated coiled coil containing protein kinase2 (Rock2); Matrix metalloproteinase2(CEBPD); Primary hepatocellular carcinoma IV 目录目录第1 章引言1 第2 章材料与方法3 2.1 材料3 2.1.1 临床标本收集3 2.1.2 实验细胞3 2.2 主要试剂3 2.3 自配试剂4 2.4 主要仪器设备6 2.5 细胞培养6 2.5.1 细胞传代6 2.5.2 细胞冻存7 2.5.3 细胞复苏7 2.6 提取总RNA 及聚合酶链反应（PCR ）8 2.6.1 肝癌组织和癌旁组织RNA 提取8 2.6.2 细胞RNA 提取8 2.6.3 RNA 逆转录成cDNA 9 2.6.4 梯度PCR 选取最适退火温度9 2.6.5 实时荧光定量PCR 检测Rock2 和CEBPD 的mRNA 表达水平 11 2.7 蛋白提取及Western blot 检测Rock2 和CEBPD 蛋白表达 11 2.7.1 肝癌组织和癌旁组织蛋白的提取 11 2.7.2 细胞蛋白的提取12 2.7.3 BCA 法测定蛋白浓度12 2.7.4 SDS －PAGE 凝胶电泳13 2.7.5 转膜13 2.7.6 免疫反应13 2.7.7 蛋白检测13 2.8 在 HCCLM3 细胞及 SMMC7721 细胞中转染 shRNA 后检测 Rock2 和 V 目录 CEBPD 的 mRNA 及蛋白的表达水平13 2.8.1 设计合成针对Rcok2 基因特异性shRNA 序列13 2.8.2 实时荧光定量PCR 分析转染 shRNA 后细胞Rock2 和 CEBPD 的 mRNA 表达水平变化情况14 2.8.3 Western blot 分析转染shRNA 后细胞Rock2 和CEBPD 的蛋白表达水平变化情况15 2.9 CCK8 细胞增殖实验16 2.10 EdU 实验步骤：16 2.11 统计学分析16 第3 章结果17 3.1 Rock2 在肝癌组织中高表达，CEBPD 在肝癌组织中低表达且两者呈负相关性17 3.2 沉默肝癌细胞中Rock2 的表达后发现CEBPD 的mRNA 和蛋白表达水平上调19 3.3 Rock2 通过调节CEBPD 表达从而影响肝癌细胞的增殖功能19 第4 章讨论21 第5 章结论23 致谢24 参考文献25 攻读学位期间的研究成果27 综述28 VI 目录 VII 第1 章引言