一种新型抗体导向核酸转移系统关键组分的制备及鉴定.pdfVIP

广东药学院学报 }ournal 01 Guangdong Pharmaceutical University Jun. 2015.31 (3) 医噩圄 一种新型抗体导向核酸转移系统关键组分的 制备及鉴定 刘晓芬ljt 云2 ，张萃l ，吴强1 ，肖笑荣l ，刘晓波l (1.广东药学院基础学院，广东广州 510006; 2.)11 北医学院基础医学院，四川南充 637000) 摘要:目的制备并鉴定葡萄球菌A 蛋白-多聚赖氨酸交联物(SPA-PLL 交联物) ，以此交联物为接头 构建一种新型的抗体导向核酸转移系统。方法采用 SPDP 化学偶联法制备 SPA-PLL 交联物;采用 SDS­ PAGE 电泳法测定SPA-PLL 交联物的纯度·采用酶联法或 DNA 凝胶阻滞实验分别测定SPA-PLL 交联物 与 IgG 或 DNA 片段的结合;将 SPA-PLL 交联物与Tfr 抗体和 pEGFP-C1 质粒以适宜的质量比混合即可 组装成T仕抗体导向 pEGFP-C1 质粒转移系统;将该抗体导向的 pEGFP-C1 质粒转染人肝癌 HepG2 细 胞，在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP) 的表达。结果 SPA-PLL 交联物纯度较高，能良好地结合多 种 IgG 抗体，同时也能较好地结合pEGFP-C1 质粒、中和其负电荷;Tfr 抗体导向 pEGFP-C1 质粒转移系统 能特异性地转染 HepG2 细胞，并使 pEGFP-C1 质粒在细胞中有效表达。结论 SPA-PLL 交联物能与核酸片 段和IgG 抗体非共价结合，并具有良好通用tl:;以此制备抗体导向核酸转移系统的过程简单方便。 关键词:葡萄球菌A 蛋白(SPA) ;多聚赖氨酸(PLL); IgG; 核酸;基因转染 中图分类号:R392.12 文献标志码:A doi: 10.3969/j.issn.1006-8783.2015.03.020 文章编号: 1006-8783 (2015) 03-0372-06 Preparation of SPA-PLL conjugate as a key component for construction of a novel antibody-targeted non-virus gene delivery system LIU Xiaofen 1 ,LlU Yun2 ,ZHANG Cui 1 ,WU Qiang 1 ,XIAO Xiaorong 1 ,LlU Xiaobo 1 ( 1.School of Bαsic Courses , Guangdong Phαrmaceutical University , Guangzhou 510006 ,Chinα; 2. School of Basic Medicne ,North Sichuan Medical University ,Nanchong 637000 ， Chinα) Abstract: Objective To prepare SPA-PLL conjugate as a component or adaptor for construction of a novel antibody-targeted gene delivery system. Methods SPA-PLL conjugate was prepared by SPDP chemically crosslinking technique and its purity was measured by SDSelectrophorisis. The bindings of SPA- PLL conjugate to IgG and DNA were assayed by ELISA and gel retardation assay ,respectively. Tfr-specific antibody-targeted pEGFP-C1 plasmid delivelγsystem