花生果皮全长cDNA文库的构建及初步分析.pdfVIP

福建农林大学学报(自然科学版) 第42 卷第1 期 Joumal of Fujian Agriculture and Fores町University (N础ual Scien优Edition) 2013 年1 月 花生果皮全长cDNA 文库的构建及初步分析 陈华，姜宝杰，张冲，蔡铁城，曾建斌，邓烨，庄伟建 (福建省作物分子与细胞生物学重点实验室，福建福州 35α)()2 ) 摘要:以闽花6 号花生为材料，利用SMART 技术构建了花生果皮全长cDNA 文库从花生果皮中分离、纯化的 cDNA 片段 连接到经研I 酶切的 pDNR-IlB 载体上，经电击转化在得原始文库，经过涂平板测定和酶切反应快速鉴定表明，原始文库 滴度达1.3 x 10 巾，重组率达95.5% ，插入片段大小多为7到-2翩峙，平均大小在1制bp 左右.随机挑选30 个单克隆进 行双向测序，获得有放序列25 条，序列经GenBank 检索和生物信息学比较，17 个获得了全长，所占比例为68%. 有 13 条序 列与其他植物已知功能氨基酸序列具有较高的相似性.说明得到了高质量的全长cDNA 文库，这为筛选和克隆花生果皮特 异表达基因和分离果皮特异启动子提供了基础. 关键诩:果皮;花生; SMART 技术;cDNA 文库 申固分类号:白65.2 文献标识码:A 文章编号:1671-5470(2013 )01，，(则157，，(后 Construction and primary analysis of P倒nut pericarp full-leng由 cDNA library CHEN Hua，丑ANG Bao才ie ， ZHANG Cho鸣， CAI Tie-che吨， ZENG Jian-bin , DENG Ye , ZHUANG Wei-jian (F可ian Provincial Key I.abor脚ry of crop Molecular and cell Biology , Fuzhou , Fujian 35创胆， China) Ab由割草: A full-ler眼h cDNA library from 也e peri饵Ip of Mi曲回6 pean凶 was ∞nstructed based 侃 switching m臼hanism at 5end ofRNA 国nscript (SMART) system. 哑le pur谊d 也曲，le strand cDNA w四 ligated to 8ft 1 di伊时vector pDNR- IlB, and trans- fom时intoDH5αby electroporation. The en町library constructed has a high titer of 1.3 x 10 cfu. PCR resul饱 8howed 由at 也e in- 阳ts var说from 750 to 2000 bp with ave吨e size larger 也皿 1(胁bp and 95.5% of recombinant pereentage. As results bioinfomta- tics analys归， about 68% of sequences were full-leng也.四挝eens吨uences with known functions were iden曲ed by BlastX能arched against the NCBI non-redun恤t protein datab画es. Ib跚跚曲创llbeωeful for screening and cloning periωIp special expre倒ion ger田 andadding 萨netic information for peanut. Key wonls: 严riω甲; pt.8llut; SMART sys饱m; cDNA library 花生果皮由子房壁发育而来，由外果皮、中果皮、内果皮组成.外果皮含表皮和周皮层;中果皮含薄壁 细胞、纤维层和维管束;内果皮由内薄壁细胞和内表皮组成.在发育成熟的过程中，中果皮纤维层日益木质 化，果壳逐渐变薄、变硬(1) 花生在其生长发育以及