高糖对人腹膜间皮细胞间隙连接蛋白的影响.docVIP

　　高糖对人腹膜间皮细胞间隙连接蛋白的影响 作者：曹东维,张苗,何劲松,蒋春明 【摘要】 目的 研究高糖对人腹膜间皮细胞间隙连接蛋白(connexin43)表达的影响。方法 分离培养人腹膜间皮细胞，细胞分为3组:正常糖组(含5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(含140 mmol/L葡萄糖)和渗透压对照组(含5.5 mmol/L葡萄糖加24.5 mmol/L甘露醇),培养24、48 h后，应用Northern blot、C). Methods HPMCs isolated and cultured in vitro al glucose group (5.5 mmol/L), high glucose group (140 mmol/L) and osmotic control group (5.5 mmol/L glucose group plus 24.5 mmol/L mannitol). At 24 h and 48 h of culture, the expression of connexin43 mRNA and protEin ined by Northern blot and C, ight contribute to the mechanism of the integral damage to the peritoneal mesothelium during prolonged peritoneal dialysis. 　　Key esothelial cells; connexin43; peritoneal dialysis 　　腹膜透析(peritoneal dialysis，PD)是终末期肾病肾脏替代疗法中的主要方法之一。但是,腹膜长期暴露于非生理性的PD液中(低pH、高浓度葡萄糖以及高渗透压)会致腹膜纤维化，从而导致腹膜结构和功能的丧失，这是患者放弃腹膜透析的原因之一[1-2]。近年来的研究发现,PD导致人腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells， PMC)的形态学改变,如微绒毛的丧失、细胞间隙增宽以及细胞脱落。腹膜间皮细胞脱落后,高渗葡萄糖一方面干扰间皮的再生,一方面造成裸露的间皮下基质重构,导致成纤维细胞增生及细胞外基质的积聚,最终形成腹膜纤维化,超滤功能丧失,终止PD[3]。因此,造成腹膜纤维化最关键的始动因素就是PMC损伤、脱落[4-5]。而PMC脱落是由于其细胞间隙连接结构遭到损害所致。PMC间的连接包括紧密连接、间隙连接、桥粒以及粘合连接。间隙连接是由两个相邻细胞膜上紧密装配的连接蛋白组成的通道结构，连接蛋白分为很多亚型，其中分布最广的是connexin43。 　　本研究通过体外观察高糖对人PMC细胞间通讯功能和连接蛋白connexin43的影响,探讨高糖对人PMC间通讯功能的影响机制,为防治腹膜纤维化——PD最主要的并发症提供可靠的理论依据。 　 　1 材料和方法 　　1.1 人腹膜间皮细胞的分离、培养与鉴定 取非尿毒症和糖尿病择期手术患者的网膜作为细胞来源,按 　　 2 结 果 　　2.1 高糖对腹膜间皮细胞connexin43 mRNA表达的影响 高糖组培养的细胞24 h时connexin43 mRNA表达显著降低，与正常糖组及渗透压对照组比较，差异有统计学意义(Plt;0.05)，48 h更显著，见图1。 　　2.2 高糖对腹膜间皮细胞connexin43蛋白表达的影响 高糖可抑制腹膜间皮细胞connexin43蛋白的表达，24 h后高糖组细胞connexin43蛋白较正常糖组和渗透压对照组降低，差异有统计学意义(Plt;0.05)，48 h差异更加显著，见图2。 　 　3 讨 论 　　腹膜透析作为有效的肾脏替代 治疗 方法已经被越来越多的尿毒症患者所接受,随着腹膜透析时间的延长,腹膜发生纤维化导致腹膜功能衰竭是患者退出治疗的主要原因之一。含糖腹膜透析液具有明显的生物不相容性,其导致腹膜间皮细胞损伤被认为是腹膜透析相关腹膜纤维化的关键因素。而有效保护腹膜间皮细胞则可以明显延缓腹膜纤维化的进程。研究表明[7]腹膜透析液相关浓度的葡萄糖可使腹膜间皮细胞端粒长度缩短，细胞周期停滞于G1期，细胞周期蛋白P21表达增加。但是有关高糖对腹膜间皮细胞间隙连接蛋白和细胞间通讯功能影响的研究极少。本研究从基因和蛋白质的角度初步探讨了高糖对腹膜间皮细胞间隙连接蛋白的影响。 　　间隙连接是由相邻的两个细胞膜上紧密装配的连接蛋白组成的通道结构，是大多数动物细胞间进行物质和信息交换的关键结构，可以传递相对分子质量小于1 000的分子及离子，如钙离子、核苷、氨基酸等，在胚胎发育、细胞增殖分化的调节等方面具有重要作用[8]。connexin43是分布较广