蛋白质提取过程中常用的蛋白酶及磷酸酶抑制剂详细使用说明.docVIP

蛋白质提取过程中常用的蛋白酶和磷酸酶抑制剂详细使用说明转自:/html/980.html在与蛋白相关的检测中，最关键的一步便是蛋白质的提取。在提取的过程中，我们要经常加入以防止。另 外在磷酸化蛋白的研究过程中，也是必不可少的。 本文详细总结了常用的PMSF、 Leupeptin亮肽素、Aprotinin抑肽酶、Pepstatin胃、EDTA-Na2等 以及NaF氟化钠、Na3VO4原 矾酸钠、Beta-glycerophosphate甘油磷酸钠、Na2P2O4焦 磷酸钠等的溶液配制、贮存液与工作液浓度及保存条件。一、蛋白酶抑制剂 PMSF：特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和凝血酶，也抑制 半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶。 溶解性：溶于异丙醇、乙醇、甲醇和丙二醇里10mg/ml。在 水溶液中不稳定。在100%异丙醇，25时稳定至少9个月。分子量：174.2使用：贮存浓度200mM，工作浓度1mM Leupeptin 亮肽素特性：抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤溶酶和组织蛋白酶B。溶解性：高度溶于水（1mg/ml）。4一周稳定，分成小份，冷冻在 -20至少6个月。分子量：C20H38N6O4×1/2 H2SO4:475.6 C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 × H2O:493.6使用：贮存浓度1mg/ml，工作浓度0.5 ug/ml (1mM)。 Aprotinin抑肽酶特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制纤维蛋白溶酶、激肽释放酶、胰蛋白酶、 糜蛋白酶的高活性。不抑制凝血酶或因子X。溶解性：易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如0.1M tris，pH8.0）。pH约7~8的溶液在4可保存1周，分装保存在-20可至少保存6个月。避免反复冻融, pH12.8的碱性环境可使其灭活。分子量：6,512使用：贮存浓度1mg/ml，工作浓度0.06~2.0 ug/ml(0.01~0.3 uM)。 Pepstatin胃蛋白酶抑制剂特性：抑制天冬氨酸（酸）蛋白酶如胃蛋白酶、肾素、组织蛋白酶D、凝乳 酶、许多微生物酸性蛋白酶溶解性：溶于甲醇约1mg/ml； 可溶于乙醇，过夜溶解可达到1 mg/ml；在6当量乙酸中溶解度为300ug/ml。4稳定一周，分装储存于-20时可保存1个月。分子量：685.9使用：贮存浓度1mg/ml，使用浓度0.7 μg/ml(1 μM)。 EDTA-Na2特性：金属蛋白酶抑制剂溶解性：溶于水至0.5M，在pH8-9的条件下，4稳定至少6个月分子量：372.24使用：工作浓度0.2~0.5 mg/ml(0.5~1.3 mM)，不需现用现配，在溶液pH值调至8~9时再加入。 二、NaFNaF是针对pSer/Thr氟化钠溶解性：溶于水分子量：41.99使用：贮存液5M，工作浓度10~20mM。 Na3VO4 Na3VO4是针对pTyr原矾酸钠分子量：183.91溶解性：溶于水，我们购买过来的是原矾酸钠。原矾酸钠需要经过处理以后 才能成为激活的矾酸钠，激活的矾酸钠才具有抑制去磷酸化的作用。 原因：原钒酸钠有一定程度的聚合，使用前要激活使之变成单体才有最大抑制效价 Na2P2O4 焦磷酸钠溶解性：溶于水分子量：265.9使用：贮存液100mM，工作浓度1-2 mM。 Beta-glycerophosphate 甘油磷酸钠溶解性：溶于水分子量：306.11使用：贮存液100mM， 工作浓度25mM。 使用：贮存液100mM， 工作浓度1mM，-20度保存。 原矾酸钠变成激活的矾酸钠的过程是：(1). 100mM 原矾酸钠激活储存液配制取0.183克的原矾酸钠溶解于10ml的双蒸水中，加酸调节PH至10(颜色变黄)。(2). 煮至无色(3). 室温冷却(4). 重调pH至10(5). 重复(1)(2)(3)(4)直至溶液保持无色，并且pH稳定于10，分装100ul/管，每10ml裂解液加一管。