第八章 目的基因.pptVIP

昆虫表达系统对蛋白前体的蛋白酶切割能力方面，虽然多数哺乳动物的分泌信号肽可以在昆虫细胞中得到精确处理，但带有信号肽序列却未必能分泌成熟蛋白。 利用不同哺乳动物细胞表达鼠抗人肿瘤坏死因子单链抗体时，不能产生分泌表达，而在昆虫表达系统中则可以分泌表达，这在一定程度上说明，除对信号肽的处理外，其他蛋白酶切割位点的存在数量及昆虫对它们的识别能力都与高等真核生物有差异，这些都是表达活性外源蛋白的制约因素。 * 杆状病毒表达系统每升细胞培养物能够提供500mg甚至700mg重组目的蛋白。昆虫细胞中重组蛋白的表达量在感染的后期可占总蛋白的一半，比大肠杆菌效率要高许多。 外源蛋白的表达还要受诸多因素的影响，高质量的培养基是获得高效表达的前提，昆虫细胞培养要求相对较高的氧浓度以及有高活性且生长在对数期的细胞。 此外，所表达外源基因的特性也会对表达水平产生影响。 * 三．其它昆虫表达系统 另一类稳定转化的表达系统是建立在用适当启动子驱动外源基因对昆虫进行稳定转化的基础上。 寄主细胞通常来源于双翅目昆虫，一般是果蝇和蚊子，包括来自果蝇的Schneider2和Kc以及来自白纹伊蚊的C7等细胞系。 * 此外，利用转座子转化昆虫也是一种重要的稳定转化方法。 目前已经借助hermes、hobo、manner、piggyBac等转座子完成了对果蝇、伊蚊等双翅目昆虫的稳定转化，但对鳞翅目昆虫却没有效果。 利用鳞翅目