第十章植物细胞培养的基本过程.pptVIP

4、双层滤纸培养 Horsch等（1980）将平板培养与饲养层培养技术相结合，建立了双层滤纸植板培养方法。 * 第五节 原生质体培养 原生质体的特点: ①具有全能性； ②无细胞壁障碍； ③吸收能力强、分泌能力提高； ④可进行细胞融合。 * 原生质体的制备 基础材料准备 预处理与酶解（或机械破壁） 原生质体收集与纯化 原生质体活力测定 * 1、用于分离原生质体材料的准备 无菌试管苗叶片 培养细胞 * 2、预处理与酶解 材料预处理：子叶、下胚轴;叶片;愈伤组织或胚性悬浮细胞 叶肉原生质体 * 酶处理： 酶浓度 酶解时间 酶解温度 * 3、原生质体的收集和纯化 飘浮法：常用的飘浮剂：蔗糖。 沉淀法：常用甘露醇作为渗透压调节剂，先将酶液洗出干净，再用Percoll飘浮一次。 * 4、原生质体活力检测 目测法：在显微镜下观察，根据细胞形态、流动性确定原生质体活力。 FDA法：FDA（二乙酸荧光素）是一种非极性物质，能自由地穿越细胞质膜，在活细胞内，FDA被酯酶裂解即发荧光（荧光素），由于荧光素不能自由通过质膜，因而可以在荧光显微镜下通过具荧光的细胞的观察确定细胞活性。 伊凡蓝法：伊凡蓝不能穿过质膜，只有质膜受到严重损坏使，细胞才能被染色，因而可以通过细胞被染色与否确定活性。 * 原生质体培养方法 * * 第一节 植物细胞的获取