实验19 亚铁嗪显色法测定血清铁和总铁结合力.pptVIP

实验 19 亚铁嗪显色法测定血清铁和总铁结合力 实验目的 掌握：血清铁及总铁结合力测定的原理和方法。 熟悉：血清铁及总铁结合力测定的临床意义。 总铁结合力(TIBC)是指血清中的运铁蛋白全部被铁饱和所能结合的铁量。 将过量铁标准液加到血清中，使之与未带铁的运铁蛋白结合，多余的铁被轻质碳酸镁粉吸附除去，然后测定血清中总铁含量，即为总铁结合力。 1．0.4mol/L甘氨酸-盐酸缓冲液（pH2.8） 2. 亚铁嗪显色剂 3. 1.79mmol/L铁标准贮存液 4．35.8μmol/L铁标准应用液 5．179μmol/L TIBC铁标准液 6．轻质碳酸镁粉。 1.血清铁增高 : ①红细胞破坏增多时 ②红细胞的再生或成熟障碍 2.血清铁降低： 常见于缺铁性贫血、慢性长期失血、恶性肿瘤等。 3.血清总铁结合力增高：常见于缺铁性贫血、急性肝炎等。 4.血清总铁结合力降低：常见于肝硬化、肾病、尿毒症和血色素沉着症等。 1．实验用水必须经过去离子处理。玻璃器材必须用10%（V/V）盐酸浸泡24h，取出后再用去离子水冲洗后方可应用。应避免与铁器接触，以防止污染。 2．溶血标本对测定有影响，因此血清应避免溶血。 3．标准液呈色可稳定24h。血清呈色在30min内稳定，此后颜色会慢慢增加，大约每小时吸光度增加0.002，因此，应在1h内比色完毕。 4．血清铁存在着日内生理性变异，早上含量最高，晚上含量最低。 1．血清铁的测定方法有多种，比色法仍然是测定血清铁的主要方法。 2．比色法中，由于显色剂的不同而有多种方法。目前常用的显色剂主要有铬天青、亚铁嗪、2-（5-溴-2-吡啶偶氮）-5-二乙氨基酚（5-Br-PADAP）、菲罗啉等。 3．171μmol/L以下胆红素对比色法测定血清铁干扰不大；甘油三酯在3.39mmol/L以下基本无干扰，3.73mmol/L仅增高0.94%，5.56mmol/L增高5.6%；在生理条件下铜与铜蓝蛋白结合，故对铁的测定基本上无干扰。 1. 阐述血清铁和总铁结合力测定的原理。 2. 在血清铁测定中，对实验用水和器材有何要求？为什么？ * * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验19 亚铁嗪显色法测定血清铁和总铁结合力 宁夏医科大学检验学院　韩学波 实验原理 Fe3++运铁蛋白 复合物 复合物 Fe2+ Fe2++亚铁嗪 紫红色复合物 一、亚铁嗪显色法测定血清铁 紫红色复合物在562nm处有吸收峰，与同样处理的铁标准液比较，即可求得血清铁含量。 实验原理 二、亚铁嗪显色法测定血清总铁结合力 试剂与器材 90 90 90 试剂Ⅱ 混匀，37℃孵育5min 270 270 270 试剂Ⅰ 4 － － 样品 － 4 － 校准液 － － 4 蒸馏水 样品管 校准管 空白管 加入物（μl ） 　 (2) 混匀，37℃孵育，在60s和120s时，在405nm处，以空白管为对照，读取吸光度值,计算△A/min。 操作步骤 (1) 按下表向各管加入相应试剂 1. 血清铁测定 操作步骤 在试管中加入血清0.45ml，179μmol/L TIBC铁标准液0.25ml及去离子水0.2ml，充分混匀后，放置室温10min。加入碳酸镁粉末20mg，在10min内振摇数次，3 000r/min离心10min。取上清液。 2. 血清总铁结合力测定 按上述与血清铁测定同样操作。 计算 由于两次测定时溶液体积不同，故应将血清空白吸光度乘以0.97校正。 参考范围 1．血清铁 成年男性 11μmol/L～30μmol/L 成年女性 9μmol/L～27μmol/L 2. 血清总铁结合力 成年男性 50μmol/L～77μmol/L 成年女性 54μmol/L～77μmol/L 临床意义 注意事项 评价 思考题