基础植物生物技术实验课教学大纲.doc-东北农业大学植物科学与技术.doc

教学大纲 -基础植物分子生物技术 （一）实验课程简介（实验课程的特点，发展现状） 农业生物技术实验课程的开设，是建立在理论课基础上。在分子水平进行生物学操作是共同关心并十分重视的问题。就是的一般原理在实验中所涉及的技术方法，原理和策略，。随着生物科学和生物技术的日益发展，人们越来越重视对生物学研究手段的了解和掌握。特别是二十世纪八十年代以来，以分子生物学为代表的学科领域取得了翻天覆地的变化。是农业大学适应学科发展应运而生的特色课程，。实验课的培养目标与理论课的培养目标视一致，通过实验课进一步加深对基因操作原理的认识和掌握，从实践的角度让学生掌握基因是怎样去研究的、基因工程是如何实现的，如何设计研究基因的基本方案，为学生进入研究生阶段开展分子生物学研究打好理论和思维基础，为本科毕业从事生物技术和生物科学工作强化基因操作的认识实验项目一 质粒DNA的小量制备 1．实验特点 实验类型：验证 实验类别：专业基础 计划学时：4 每组人数：7 首开日期：2006.6.5 说明：实验类别指基础、专业基础、专业 实验类型指验证、综合、设计。 每组人数指教学实验项目中在每套仪器设备上完成本实验项目的人数。 2．实验目的与要求 学会最常用的小量制备质粒DNA的碱裂解方法。 3．主要仪器设备 序号 主要仪器设备名称 型号规格 数量 1 超净工作台 1 2 旋涡混合器 1 3 恒温摇床 1 4 微量移液取样器 4 4．实验内容提要 通过溶液I、溶液II、溶液III的加入及离心等操作，得到质粒DNA，溶于无菌水中。 5．实验操作要点 取1.5ml的菌液于1.5ml离心管中，12000rpm离心1min，弃上清液，留沉淀备用。 在沉淀中加入100(l 溶液I，盖上盖后立即在涡旋混合器上混匀，室温下静置5min。 加入200(l 溶液II，盖上盖后上下颠倒几次混匀，插入冰中，放置5min。 加入150(l 溶液III，盖上盖后上下颠倒几次混匀，插入冰中，放置5min。 15000rpm离心5min，小心吸取400(l 上清液于另一个干净的1.5ml离心管中，加入800(l 95% 乙醇，盖上盖后立即在涡旋混合器上混匀，室温下静置5min。 15000rpm离心10 min，小心弃掉上清液，加入500(l 70% 乙醇，盖上盖后立即在涡旋混合器上混匀。15000rpm离心10 min，小心弃掉上清液，尽量倒置弃干净 ?再加入500(l 70% 乙醇，盖上盖后立即在涡旋混合器上混匀。15000rpm离心10 min，小心弃掉上清液，尽量倒置弃干净 ?离心管倒置于37(C培养箱中（或室温）空气干燥。（管底的沉淀质粒DNA用肉眼几乎看不见！）。 每管加入10(l蒸馏水混匀后收集到一个管中，涡旋混合器上混匀，在离心机中瞬时转一下，使溶液集中在管底。待电泳确认。用记号笔标记后放入冰箱中备用。 清理桌面，清洗仪器，撰写实验报告 6．注意事项 （1）试剂添加顺序不能弄混，尤其是溶液I、溶液II、溶液III的加入顺序。 （2）离心时间要控制，使用时离心机要注意对角线上离心管要配平，防止离心机非正常工作。 （3）写作实验报告和实验论文一定要文理通顺、逻辑清晰、图表说明详细，讨论分析透彻（包括操作的错误）。 实验项目二 质粒DNA电泳鉴定 1．实验特点 实验类型：验证 实验类别：专业基础 计划学时：4 每组人数：7 首开日期：2006.6.8 说明：实验类别指基础、专业基础、专业 实验类型指验证、综合、设计。 每组人数指教学实验项目中在每套仪器设备上完成本实验项目的人数。 2．实验目的与要求 学会常用的DNA琼脂糖凝胶电泳。 3．主要仪器设备 序号 主要仪器设备名称 型号规格 数量 1 电泳仪 1 2 分光光度计 1 3 微波炉 1 4 微量移液取样器 4 4．实验内容提要 将实验一所提取的质粒通过1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测。 5．实验操作要点 称取0.5g琼脂糖粉，放入三角瓶，加入50ml 1( TAE电泳缓冲液，放入微波炉中1min，待完全熔化。 冷却致不烫手（约50-60(C）加1(lEB。 把梳子插到凝胶灌制模具的正确位置后缓缓倒入胶溶液。静置10-20分钟待胶完全凝固。 在水平电泳槽中加满1(TAE电泳缓冲液。根据电泳槽的长度把电泳仪的电压调至170V(10V/cm)，注意正负电极的位置连接正确。 待胶完全凝固后（15-20分钟），小心拔出梳子。凝胶上有样品孔的一侧要朝向电泳槽的负极。 剪1片光面纸（或封口膜），点6(l蒸馏水、1(l 10(加样缓冲液，再加入