基因的突变筛查包括已知和未知突变.ppt

 基因的突变筛查包括已知和未知突变 变性高效液相色谱(DHPLC)技术是一种能用于快速，自动和高通量检测基因的技术平台。 利用该技术可以对单链和双链核酸进行快速、准确、自动化的分离、分析和定量；可用于单碱基替换（或单核苷酸多态性），小片段缺失或插入等多种已知和未知基因突变的检测 原理 DHPLC技术是利用液相色谱技术（HPLC），既在高压闭合液相流路中，将DNA样品自动注入并在缓冲液携带下流过专利的DNA分离柱，通过缓冲液的不同梯度变化，在不同分离柱温度条件下实现对DNA不同的分析； 由紫外检测或荧光检测被分离的DNA样品，自动DNA片段收集器可根据需要自动收集被分离后的DNA样品，整个分析过程都是在计算机通过专用软件包NAVIGATOR完成的， 专利的DNA分离柱具有很好的温度稳定性和酸碱稳定性，具有很长的有效寿命（大于6000次进样）和极好的分析稳定性（99%） DHPLC DNA色谱分离柱工作原理 DNA分离柱，是使用无孔多苯乙烯-二乙烯基苯（PS-DVB）共聚物微球体作为稳定基质。 图1. 分离柱表面的化学反应：TEAA分子与基质的微球体通过疏水键相连，而它的正电荷基团与带负电DNA分子相互作用。 内容提示 高分辨熔解曲线（High Resolution Melting） 高分辨熔解曲线在遗传育种中的应用 — 筛查突变 （mutation scanning） — 基因分型（Mutation Genotyping） —小片段+内标法（ Small Amplicon Genotyping ） —非标记探针法（Unlabeled Probe Genotyping，LunaProbe） —SSR分析 — 检测甲基化 HRM仪器 DHPLC工作的三种操作模式 工作模式 温度范围 应用范围 分离原理 非变性 50℃ 鉴定双链DNA片段长度（小于2000bp） 按片段长度分离，与序列无关 PCR产量检查和产物纯化 定量分析（Q-RT-PCR） 部分变性 52-75℃ （平均范围） 突变检测 依靠片段大小和序列分离 单核苷酸多态性（SNP）研究 完全变性 75-80℃ （平均范围） 鉴定单链DNA片段长度（小于2000bp） 依靠片段大小和序列分离 RNA分析（用RNASep柱） ? 寡核苷酸分析（DNASep柱与OLIGOSep 柱）和纯化（片段收集器）。大量纯化需用OLIGOSepPrepTM HC柱 DHPLC技术的特点： 检测的准确性高，对未知突变大于96%，已知突变大于99%。 检测灵敏度高，能检测低水平的突变，可靠检测样品中少至5%的基因型。 可分析异质性样本，可进行混合样品的分离检测。 操作容易，自动化分析。 结果重复性高，速度快。 样品通量高。 消耗品低价性，性价比高。