致病菌检验方法.pptVIP

6、硝酸盐还原产气试验 接种被检纯培养物于 硝酸盐胨水培养基中， 37℃培养 24h。小倒 管中有气体者，为阳 性，表明该菌能还原 硝酸盐，产生氮气。 * 7、明胶液化试验 将可疑菌落穿刺接种在明胶 培养基内，37℃培养24h,取 出放冰箱10~30min，如何呈 溶解状态，即为明胶液化试 验阳性，如凝固不溶者为阴 性。 * 8、42℃生长试验 挑取纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基 上，放在41℃~42℃培养箱中24h~48h，绿脓 菌能生长，为阳性。不能生长为阴性。 * * 金黄色葡萄球菌 依据：GB7918.5-87 化妆品微生物标准检验方法 金黄色葡萄球菌 * 检验程序 增 菌 分 离 染色镜检 甘露醇发酵试验 血浆凝固酶试验 报 告 37℃ 18~24h 37℃ 24~48h * 1、增菌： 取样液按1：10比例接 种到SCDLP液体培养基 中，或者可用7.5 %氯 化钠肉汤，置 37℃培 养箱，培养24h。 * 2、分离 将增菌培养液划线接种 于血琼脂平板置37℃培 养24~48h，菌落呈金黄 色，大而突起，圆形， 不透明，表面光滑，周 围有溶血圈。 * 3、染色镜检 挑取可疑菌落涂片 染色镜检，该菌为 革兰氏阳性球菌， 排列成葡萄状，蓝 紫色。 * 4、甘露醇发酵试验 取上述分纯菌落接种 到甘露醇发酵培养基 中，置 37℃培养箱， 培养24h。金黄色葡 萄球菌应能发酵甘露 醇产酸。 * 5、血浆凝固酶试验 玻片法：取清洁干燥载玻片上，一端加一滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑取菌落，分别在生盐及血浆中充分研磨混合。血浆与菌在5min内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象都为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验阴性或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。 * 5、血浆凝固酶试验 试管法：吸取1：4新鲜血浆0.5ml，加入待检菌24h肉汤培养物0.5ml。混匀，于37℃水浴或恒温箱中，半小时观察一次，24h 内呈现凝块为阳性。 * 5、血浆凝固酶试验 乳胶凝集法金黄色葡萄球菌鉴定试剂盒 * 志贺氏菌 依据：GB 4789.5-2012 食品安全国家标准 食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验 * 检验程序 * 沙门氏菌 依据：GB 4789.4-2010 食品安全国家标准 食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验 * * 基本操作步骤 1、前增菌：BPW(缓冲蛋白胨水） 2、增菌： TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液） SC （亚硒酸盐胱氨酸增菌液） 3、分离：① BS（亚硫酸铋琼脂） XLD（木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂） ② HE琼脂 沙门氏菌显色培养基 * 基本操作步骤 4、生化试验：TSI（三糖铁） 赖氨酸 靛基质 尿素琼脂 氰化钾（KCN）培养基 蛋白胨水 或直接用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统 5、血清学鉴定：O抗原、H抗原、Vi抗原、菌型鉴定 * * 致病菌检测方法 福建省疾病预防控制中心 陈路瑶 * 需要检测的致病菌 乙型溶血链球菌 大肠杆菌 绿脓杆菌 金黄色葡萄球菌 志贺氏菌 沙门氏菌 * 溶血性链球菌 检测依据：GB/T 4789.11-2003 食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验 * 检验程序 检 样 葡萄糖肉汤 血平板 血平板（分纯培养） 链激酶试验 杆菌肽敏感试验 观察溶血 革兰氏染色 报 告 36℃±1℃ 24h 36℃±1℃ 36℃±1℃ 24h 24h * 1、菌落特征： 溶血性链球菌菌落 特征：灰白色细小 针尖样。菌落周围 形成一个2-4mm宽、 界限分明、完全透 明的无色溶血环。 * 2、革兰氏染色： 乙型溶血性链球菌 为革兰氏阳性球菌， 在镜下呈现为蓝紫 色，圆形，链状排 列。 * 3、杆菌肽敏感试验 乙型溶血性链球菌 对杆菌肽敏感，在 涂布了该菌菌液的 血平板上贴上杆菌 肽，36℃培养18~ 24h，如果有大于 10mm的抑菌带出 现即为阳性。 * 4、链激酶试验 乙型溶血性链球菌能产生 链激酶，能激活正常人体 血液中的血浆蛋白酶原， 凝固 形成血浆蛋白酶，而后溶 解纤维蛋白。试验中，能 使凝固的血浆完全溶解为 溶解 链激酶试验阳性。 * 大肠杆菌 依据：GB15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准 附录