拟态弧菌OmpU蛋白在草鱼肠组织中互作蛋白的筛选鉴定.PDF

微生物学通报 Mar. 20, 2017, 44(3): 673−679 Microbiology China /wswxtbcn tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.160204 研究报告 拟态弧菌 OmpU 蛋白在草鱼肠组织中互作蛋白的筛选鉴定 胡丹丹 肖宁 戚莉芳 李槿年* ( 230036) 摘 要：【目的】为了确定草鱼肠组织蛋白中能与拟态弧菌 OmpU 黏附素蛋白发生互作的蛋 白。【方法】在前期构建重组表达质粒pET-32a-OmpU 基础上，通过IPTG 诱导表达及亲和层析 纯化获得可溶性His-OmpU 融合蛋白，经Western blot 分析显示该重组融合蛋白与OmpU 多克 隆抗体具有良好的反应原性。以His-OmpU 融合蛋白为诱饵蛋白，利用His-tag pull down 试验 筛选草鱼肠组织蛋白中与OmpU 黏附素蛋白结合的蛋白，并经 SDS分离、液相色谱- 串 联质谱(LC-MS/MS)鉴定以及Mascot 与蛋白数据库检索。【结果】共鉴定出5 个体外互作蛋白， 分别为α-肌动蛋白2 (α-Actin 2)、细丝蛋白A (Filamin A) 、α-辅肌动蛋白4 (α-Actinin 4)、转胶蛋 白2 (又称肌动蛋白结合蛋白2 ，Transgelin-2)和调宁蛋白2 (Calponin-2)。 【结论】GO 功能注释 分析显示，这些互作蛋白属于细胞骨架蛋白和细胞骨架调节蛋白，在病原菌的黏附、内化和致病 中起着重要作用。研究结果为后期研制黏附拮抗剂和探究拟态弧菌分子致病机理奠定了基础。 关键词：拟态弧菌，OmpU 黏附素蛋白，肠组织，互作蛋白 Screening and identification of interacting intestinal proteins of Ctenopharyngodon idella with OmpU of Vibrio mimicus * HU Dan-Dan XIAO Ning QI Li-Fang LI Jin-Nian (Key Laboratory of Zoonoses, College of Animal Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui 230036, China) Abstract: [Objective] In order to determine interaction between outer membrane protein U (OmpU) of Vibrio mimicus and the proteins of intestinal tissue of grass carp. [Methods] By construction of recombinant expression plasmid pET-32a-OmpU, we obtained the soluble fusion His-OmpU protein through IPTG induction and affinity purification. Western blot analysis showed the expressed His-OmpU protein could be combined by polyclonal antibody of OmpU. The protein