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实 验 七 DNA的细胞化学 —Feulgen反应 了解Feulgen反应的原理，掌握有关的操作方法。 Schiff试剂是由碱性品红和偏重亚硫酸钠作用，形成无色的品红液，当无色品红与醛基结合则形成紫红色的化合物。因此凡有DNA的地方，都能显示紫红色。紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色基团，所以具有颜色。材料不经过水解或预先用热的三氯醋酸或DNA酶处理，得到的反应是阴性的，从而证明了Feulgen反应的专一性。 ⑴仪器、用具：显微镜、恒温水浴箱、温度计、解剖针、酒精灯、试管、烧杯、载玻片、盖玻片、吸水纸。 ⑵材料：洋葱鳞茎或根尖。 ⑶试剂 1）1mol/L盐酸的配制：取82.5ml密度1.19 g/ml的浓盐酸加蒸馏水至1000ml。 2）亚硫酸水：取200ml自来水，加10ml10%偏重亚硫酸钠（或偏重亚硫酸钾）水溶液和10ml 1mol/L HCl，三者于使用前混匀。 四、 方法与步骤 1.将洋葱鳞茎内表皮(或根尖)或放在1mol/L盐酸中，加热到60℃水解8-10min. 2.蒸馏水洗3次，每次1min。 3.Schiff试剂避光染色30 min。 4.用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次1 min。 5.蒸馏水洗5 min。（或5次，每次1min） 。 6.将根尖放在载玻片上，镊子捣碎，盖上盖玻片，压片（洋葱表皮可省去压片这一步）。 7.显微镜检查，细胞中凡是有DNA的部位应呈现紫红色的阳性反应。 方法一：材料不经1mol/L盐酸水解，直接放在Schiff试剂中染色，然后按步骤4-7制片观察。 （方法二：先将材料放在5%三氯醋酸中90℃水浴15 min，主要把DNA抽提掉，然后按步骤1-7制片观察。） 1、Schiff试剂配制好后，应保存在低温避光 处，使其红色退去，方能使用； 2、该染色剂着色特强，注意不要洒出，戴手套操作； 3、配制亚硫酸水溶液一定要用自来水。 1.简图表示Feulgen反应的染色结果。 2.说明Feulgen反应中设立对照组的必要性。 College of Life Science and Technology, XINJIANG University * 一、实验目的 DNA是由许多单核苷酸聚合而成的多核苷酸，每个单核苷酸又由磷酸、脱氧核糖和碱基构成.。DNA经1mol/L盐酸水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开，使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离的醛基，这些醛基与Schiff试剂反应。 二、实验原理 二、实验原理 三、 实验仪器、材料和试剂 3）Schiff试剂的配制及保存：称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角烧瓶），时时振荡，继续煮5min（勿使之沸腾），使之充分溶解。然后冷却至50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml 1mol/L HCl，冷却至25℃时，加入0.5g Na2S2O5（偏重亚硫酸钠），充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h（有时需2-3d），使其颜色退至淡黄色，然后加入0.5g活性炭，用力振荡1min，然后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封严瓶塞，外包黑纸。滤液应为无色也无沉淀，贮于4℃冰箱中备用。如有白色沉淀，就不能再使用，如颜色变红，可加入少许偏重亚硫酸钠或钾，使之再转变为无色时，仍可使用。 三、 实验仪器、材料和试剂 * 对照片 Feulgen反应图 大鼠肾小体和肾小管细胞核呈nigert阳性反应，含紫红色反应产物 五、 注意事项 六、 作业 【完】