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氨基酸类药物的分析 2013. 9 .24 Contents 氨基酸是构成蛋白质的基本单位，具有高度营养价值的蛋白质补充剂，有着广泛的生化作用和临床疗效，可治疗蛋白质代谢紊乱、蛋白质缺损所引起的一系列疾病的重要生化药物。 一：氨基酸 的结构与物化性质 1.结构 2.物理性质 晶型 α氨基酸为白色晶体，不同氨基酸其晶体形状不相同。 熔点 氨基酸熔点一般在200—300°C,而且多在溶解时分解。 溶解度 均溶于水，但水中溶解度差别大，能溶解于强酸强碱，不溶于非极性溶剂。 旋光性 除Gly外，所有的天然氨基酸都有旋光性。 构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，在红外区和远紫外区（λ＜200nm）都有光吸收. 3.化学性质 （1） ?－氨基参加的反应 与亚硝酸反应 Van Slyke（范斯来克 ）法测定氨基酸的基础。 （2）?－羧基 参加的反应 成盐和成酯反应 在特定的化学反应中保护羧基，活化氨基。氨基酸酯是制备氨基酸的酰胺或酰肼的中间物 成酰氯反应 可使氨基酸的羧基活化，使它容易与另一氨基酸的氨基结合，用于多肽人工合成。 脱羧基反应 （3） ?－氨基 ?－羧基 共同参加的反应 旋光度 薄层层析色谱法 红外吸收光谱法（IR） 用红外分光光度法进行氨基酸鉴别时，除另有规定外，通常固体供试品均采用溴化钾片法，在400～667cm-1范围内测定其吸收图谱。 所得的吸收图谱各主要吸收峰波长和各吸收峰间的相互强度关系均应与对照的图谱一致。 茚三酮反应 当茚三酮在酸性条件下和氨基酸反应时，氨基酸被氧化分解生成醛，放出氨和二氧化碳，水合茚三酮则成还原型水合茚三酮。然后还原型茚三酮与氨，另一分子茚三酮进一步缩合生成蓝紫色物，最大吸收值的波长为570nm。 氨基酸检查： 根据《中国药典》有关物质测定 利用紫外—可见光度法测定氨基酸纯度。 氨基酸含量测定方法 酸碱滴定法 谷氨酸、天冬氨酸等氨基酸，其分子结构中均有羧基，故对其原料药一般采用氢氧化钠滴定液滴定。赖氨酸分子结构有氨基，故可以用酸碱滴定。 非水溶液滴定法 中国药典、美国药典和英国药典对所收载氨基酸类药物，除谷氨酸用氢氧化钠为标准溶液的酸碱滴定法，其余均根据其结构特性，采用了非水酸碱滴定法。 用冰醋酸作溶剂，高氯酸作标准溶液滴定，电位法或指示剂法确定终点。 适用于常量氨基酸的含量测定。 非水溶液滴定法 【例】电位滴定法测定酪氨酸的含量 P148 电位滴定法是在滴定过程中通过测量电位变化以确定滴定终点的方法。 优点：1、不需要准确的测量电极电位值 2、其准确度优于直接电位法电位滴定法是靠电极 非水溶液滴定法 滴定方法： ★将盛有供试品溶液的烧杯置电磁搅拌器上，侵入电极，搅拌，并自滴定管中分次滴加滴定液。 ★开始时可每次加入较多量，搅拌，记录电位；至将近终点前，则应每次加入少量，搅拌，记录电位；至突跃点已过，仍应继续滴加几次滴定液，并记录电位。 ★然后用坐标纸以点位（E）为纵坐标，以滴定液体积（V）为横坐标，绘制E-V曲线，以此曲线的陡然上升或下降部分的中心为滴定终点 非水溶液滴定法 计算式： P%=FT(V-V0)/S×100% P%:酪氨酸的百分含量； F:高氯酸的滴定液的浓度正因子； T:高氯酸滴定液（0.1mol/L）对酪氨酸的 滴定度，18.12； S:酪氨酸样品质量； V:供试品消耗的高氯酸滴定液的体积； V0：空白消耗的高氯酸滴定液体积； 定氮法——基本原理 定氮法——基本原理 定氮法 碘量法或溴量法 盐酸半胱氨酸因其分子结构中含有—SH，可用碘量法测定 其他方法 对于多种氨基酸制成的复方制剂中氨基酸的含量测定，可以采用HPLC或氨基酸自动分析仪进行测定 HPLC 氨基酸自动分析仪法 每1mL的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当18.12mg的无水酪氨酸 1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4)2SO4 2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4 （其中CuSO4做催化剂） 2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于H3BO3 溶液中 (NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O 3. 用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量 (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3 (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3 中国药典：每1mL硫酸滴