兔出血症病毒衣壳蛋白VP60与兔肝脏细胞中相互作用蛋白的初步筛选.pdfVIP

第 33 卷第5 期 中国预防兽医学报 Vo l. 33 ,No.5 2011 年 5 月 Chinese Journal of Preventive V，耐rinary Medicine May. 2011 doi: 1O.3969/j .issn.1008-0589.2011.05.05 兔出血症病毒衣壳蛋白 VP60 与兔肝脏细胞中相互作用 蛋白的初步筛选 穆亚芳，刘家森，郭东春，李茂中，原冬伟，姜毒，林欢，曲连东· (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室，黑龙江哈尔滨 15∞01) 摘 要:为鉴定兔出血症病毒(阳IDV)在感染兔肝脏过程中与肝细胞膜表面相互作用的靶蛋白，本研究利用 SMART 文库构建技术构建了兔肝脏细胞的真核表达 cDNA 重组质拉文库，将其转染 SP2/0 细胞，经嚓哈霉素筛 选表达兔肝细胞蛋白的阳性 SP2/0 细胞。以 RHDV-VP60 蛋白作为国相包被抗尿，经筛选，获得能够与 VP60 蛋 白相互结合的表达性阳性 SP2/0 细胞克隆。坝IJ 序表明 26 个克隆与兔的一些功能性蛋白有较高的同源性，其中包 括代谢酶类 13 个、免疫信号通路受体蛋白 5 个以及其他细胞膜蛋白等。本研究鉴定的与 RHDVVP60 具有结合 性的细胞蛋白为 RHDV 感染机制的研究奠定了基础。 关键词:兔出血症病毒;衣壳蛋白 VP60; 文库构建 中图分类号: S852.65 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2011)05-0354-04 The initial screening of the proteins in rabbit liver cells interacted with rabbit hemorrhagic disease virus capsid protein VP60 MU Ya-fang , LIU Jia-sen , GUO Dong-chun , LI Mao-zhong , YUAN Dong-wei , JIANG Qian , LIN Huan , QU Lian-dong (Division of Lab创atoty Animal , State key Laboraωry ofVe阳inary Biσ臼chnology， Harbin Ve串erinary Resωrch Insti阳旬， Chine必Academy of Agricu1tural Sciences , Harbin 150∞1 ， China) Abstract: To identify the membrane proteins of liver cells which were interacted with rabbit hemorrhagic diseωe 世rus (RHDV), we constructed an eukaryotic cDNA expression library of rabbit liver cells using the SMART library construction technology , and the recombinant plasmids wer冒 transfected into the SP2/0 cells for protein expression. Those transfected cells expressed rabbit liver cell protein were screened by inter那tion with purified RHDV VP60 protein on