4.微生物的实验室培养要点.ppt

到目前为止， 几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖 都与微生物学有关 微生物的类群 原生生物： 原核生物: 真菌: 病毒: 如酵母菌 单细胞的动植物 如草履虫、单细胞藻类等 无细胞结构 真核细胞 细菌、蓝藻 原核细胞 个体微小、结构简单 ◆微生物的共同特点： 课题1 微生物的实验室培养 1.提供营养和条件 2.防止污染 一.培养基： 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养物质。 1.基本成分： 思考：微生物“吃”什么？ 碳源、氮源、水、无机盐 ⑴碳源 无机碳源： 有机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 牛肉膏、蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 ⑵氮源 无机氮源： 有机氮源： NH4＋、NO3-（为硝化细菌提供N源和能源） 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等 一.培养基： 微生物生存的环境和营养物质 1.基本成分： 碳源、氮源、水、无机盐 2.特殊营养： 维生素、碱基等（生长因子） （牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有） 3.pH、氧气的需求： 4.种类： 固体培养基 液体培养基 有无 凝固剂琼脂 分离 鉴定 工业 生产 按用途： 按物理性质： 选择培养基 鉴别培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 分析营养构成？ 几种菌落及其形态 耐高温需保持干燥的 物品，160～170℃ 1～2小时 接种环、接种针等 金属用具 70~75℃、30min 80℃、15min 100℃、5~6min 消毒 灭菌 定义 方法 较为温和理化方法， 杀死部分有害菌体 （不包括芽孢、孢子） 强烈的理化方法， 杀死所有微生物 （包括芽孢、孢子） 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂 紫外线 灼烧灭菌 干热灭菌 酒精、氯气、石炭酸等 高压蒸汽灭菌 培养基， 100KPa、 121℃、15～30min 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 2.无菌范围： 实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 酒精灯旁操作 超净工作台 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 三.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl →琼脂 →补水定容 4.调pH、分装、封口： 5.灭菌： 6.倒平板： 培养基（高压蒸汽灭菌）、培养皿（干热灭菌） 分散成单个细胞, 形成单个菌落 倒平板 约50℃ 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答