5生物技术在育种中应用要点.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 所谓DNA指纹图谱，是指一个个体特有的DNA结构或序列所产生的图谱。 DNA指纹具有下述特点： 高度的特异性 稳定的遗传性 体细胞稳定性 * （三）分子遗传图谱的构建 遗传连锁图是指以染色体重组交换率为相对长度单位，以遗传标记为主体，通过遗传重组分析得到的基因在染色体上的线性排列图。 苹果、桃、杏、葡萄、番茄、甘蓝、白菜、甜（辣）椒和黄瓜等。 * （四）基因定位 基因定位就是筛选与目的基因紧密连锁或共分离的遗传标记,它是分子标记辅助选择育种和基因克隆的前提。 抗病基因 与代谢相关的基因 与抗逆相关的基因 雄性不育基因 自交不亲和基因 与发育相关的基因 * 抗病基因: Pto（番茄斑点病抗性基因） 与代谢相关的基因 与抗逆相关的基因 雄性不育基因 自交不亲和基因 与发育相关的基因 图位克隆(map-based cloning) 是根据功能基因在基因组中有相对稳定的基因座位，在利用分子标记技术对目的基因进行精细定位的基础上，用与目的基因紧密连锁的分子标记筛选大片段DNA文库，从而构建目的基因区域的物理图谱，在利用此物理图谱通过染色体步查(chromosomal walking)逐步逼近目的基因或通过染色体登陆(chromosomal landing)的方法最终找到包含该目的基因的克隆。 （五）图位克隆 * 园艺作物中已经克隆的部分基因 * 1. 作物MAS育种需具备的条件 ①分子标记与目标基因共分离或紧密连锁，一般要求两者间的遗传距离小于5cM，最好1cM或更小。 ②具有在大群体中利用分子标记进行筛选的有效手段，目前，主要应用自动化程度高，相对易于分析，且成本较小的PCR技术。 ③筛选技术在不同实验室间重复性好，且具有经济、易操作的特点。 ④应有实用化程度高并能协助育种家作出抉择的计算机数据处理软件。 （六）标记辅助选择 * 2. MAS育种方法 正向选择——前景选择 反向选择——背景选择 A B F1 F2 亲本A 亲本B X F1 自交 F2 …… 电泳条带 * 3. 提高分子标记的筛选效率 (1) 多重PCR方法 (2) 用相斥相分子标记进行育种选择 (3) 克服连锁累赘 (4) 降低MAS育种的成本 * （1）可以清除同一座位不同等位基因间或不同座位间互作的干扰，消除环境的影响； （3）可有效地对表型鉴定十分困难的性状进行鉴定； （6）加速回交育种进程，克服不良性状连锁，有利于导入远缘优良基因。 （5）可同时对多个性状进行选择，开展聚合育种，快速完成对多个性状的同时改良； （4）共显性标记可区分纯合体和杂合体，不需下代再鉴定； （2）在幼苗阶段就可以对在成熟期表达的性状进行鉴定，如果实性状、雄性不育等； 4. 分子标记辅助选择的优点 * （七）品种纯度鉴定 利用分子标记技术进行园艺植物品种纯度鉴定，不受环境、取材部位、时间等条件的限制,其检测位点遍及整个基因组,多态性高、准确、快速、信息量大，可以区分出形态标记难以鉴别的细微差别。 * （八）遗传稳定性检测 * 1. 质量性状基因的定位 质量性状定义：在分离群体中表现为不连续性变异、能够明确分组的性状。 数量性状定义：在分离群体中表现为连续性变异不能够明确分组的性状。 数量性状基因座(quantitative trait loci, QTL)作图：确定数量性状位点基因与分子标记间的连锁关系。 分子标记辅助选择和聚合育种！ 甜瓜雌性系MAS 获得雌性株的思路： 二对基因遗传观点： A、a：A—两性花植株上产生雌花的基因，a 是不产生雌花的等位基因。AA和Aa的个体上有雌花形成，而aa 上只产生两性花。（对G上位） G、g：G两性花植株上产生雄花的基因，g是不产生雄花的等为基因。GG和Gg基因型植株上有雄花形成，而gg基因型植株上则仅有两性花。 A-G- ：三型花株或雌雄异花同株（AAGG） AAgg: 雌性株；（如何得到A、g基因） aaGG: 雄全同株； aagg: 完全花株。 使用62对甜瓜SSR引物和192对黄瓜SSR引物和1对CAPS引物对全雌株和雄全同株两种类型进行扩增，结果引物Alu1CAPS可以在两种类型间扩增出差异，全雌株有一条特征条带在300-400bp之间，雄全同株型的特征条带在500-600bp之间（图19）。 ? ? 图19 引物Alu1CAPS在全雌株和雄全同株两种花型上的扩增谱带 M：标准分子量 a：全雌株AAgg Gene b：雄全同株aaG gene ? 雌性性状的分子