玻璃化冻存对兔关节软骨细胞存活率及生物学活性的影响.pdfVIP

山西医科大学硕士学位论文 玻璃化冻存对兔关节软骨细胞存活率及生物学活性的影响 摘要 研究背景：关节软骨的低温保存对同种异体关节软骨的移植至关重要，传统的 程序性降温法及梯度降温法不仅操作繁琐，且复苏后细胞的存活率及其代谢活 性不高。玻璃化法是近年来新发展起来的一种低温保存技术，目前已经成功的 保存了血液、胚胎、血管等细胞或组织。国内对于关节软骨细胞的玻璃化冻存 亦初见报道，但是其检测方法比较简单，且没有与传统的冷冻保存方法相比较， 不能有力的说明玻璃化冻存的优势所在。本实验采用玻璃化冻存法对关节软骨 细胞进行低温保存，并与传统的程序性降温法及梯度降温法进行比较。通过比 较复苏后软骨细胞的存活率、总凋亡率及其合成糖胺多糖的能力，评价3种不 同的低温保存方法对关节软骨细胞存活率及生物学活性的影响。 目的：1.探索玻璃化冻存法对兔关节软骨细胞的保存效果；2.比较3种不同的低 温保存方法对兔关节软骨细胞存活率及生物学活性的影响。 方法：分别采用玻璃化冻存法、程序性降温法及梯度降温法对兔关节软骨细胞 进行低温保存，采用流式细胞仪计数及阿尔新蓝染色等方法了解复苏后软骨细 胞的存活率、凋亡率及其生物学活性。 结果：采用玻璃化冻存法保存的关节软骨细胞存活率约87%，与新鲜未冷冻组 相比无显著性差异（P0.05），但明显高于程序性降温法及梯度降温法（P0.05）； 玻璃化冻存对软骨细胞合成糖胺多糖的能力有一定影响，但与新鲜未冷冻组相 比，无显著性差异（P0.05），而程序性降温组及梯度降温组细胞合成糖胺多糖 的能力均明显下降，与新鲜未冷冻组相比差异有统计学意义（P0.05）。 结论：1.兔关节软骨细胞可以通过玻璃化冻存法进行低温保存，复苏后其存活率 及生物学活性接近于新鲜未冷冻细胞；2.玻璃化冻存对关节软骨细胞的保存效果 优于传统的程序性降温法及梯度降温法。 关键词：玻璃化；低温保存；软骨细胞；冷冻保护剂；兔 1 山西医科大学硕士学位论文 EffectofVitrificationonSurvivalRateandBiological ActivityofRabbitArticularChondrocytes Abstract Background: The cryopreservation o articular chondrocytes is essentialto articular cartilage allogeneic transplantation. Traditional procedural cooling method and gradientcoolingmethodarenotonlyoperation-complicatingbutalsoneedexpensive process cooling instrument. Vitrification is a new cryopreservation technology developedinresentyears,whichhas alreadybeen successfullyusedto savethecells andtissueo blood,embryo,bloodvesselandsoon.Therehavealreadyreportsabout vitrificationindomestic,butthe detectionmethod isrelatively simple,andtherewas no comparisonwith the traditionalmethod o cryopreservation, soit couldnot show theadvantageo thevitrificationstrongly.Thisstudyhasusedvitrificationmethodto conserve the rabbits’ articular chondrocytes, and compared the results with the traditional procedural cooling method and gradient cooling method t