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基因工程;基因工程的概念 基因工程的基本工具 基因工程的基本操作程序 基因工程的应用 蛋白质工程的概念 ;1.基因工程的概念;2.基因工程的基本工具;二.“分子缝合针”——DNA连接酶 (1)E·coli DNA连接酶和T4-DNA连接酶比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②不同点：E·coli DNA连接酶只能将双链 DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯 键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末 端，但连接平末端的效率较低。 (2) DNA连接酶与DNA聚合酶作用比较: DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已 有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 ;三.“分子运输车”——运载体(质粒) (1)载体具备的条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 (2)最常用的载体是--质粒,它是一种裸露 的、结构简单的、独立于细菌DNA之外， 并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 (3)其它载体：噬菌体的衍生物、动植物 病毒。 ;3 .基因工程的基本操作程序;第二步：基因表达载体的构建 1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.组成：目的基因＋启动子