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儿茶素对农杆菌介导茶树遗传转化影响
Transformation efficiency
III
万方数据
目录
摘要 I
ABSTRACT II
1 文献综述 1
1.1 茶树转基因现状 1
1.2 农杆菌转基因的原理与过程 2
1.3 茶树自身因素对农杆菌转化的影响 3
2 引言4
2.1 研究内容及意义 4
2.2 研究路线 5
2.3 研究内容 5
3 材料和方法6
3.1 外植体材料和菌株 6
3.1.1 外植体材料 6
3.1.2 农杆菌菌株及培养 6
3.1.3 培养基及药品母液制备 6
3.1.4 主要药品和试剂 7
3.1.5 主要仪器 7
3.2 实验方法： 7
3.2.1 茶树鲜叶及愈伤组织LB 液体培养基提取液的制备 7
3.2.2 HPLC 检测茶树鲜叶及愈伤组织提取液中儿茶素及咖啡碱 7
3.2.3 培养基添加不同物质对农杆菌生长影响 7
3.2.4 发根农杆菌15834 总RNA 的提取及反转录 7
3.2.5 发根农杆菌ATCC15834 致病基因表达检测 8
3.2.6 发根农杆菌ATCC15834 转化烟草叶片 8
3.2.7 根癌农杆菌GV3101 转化烟草叶片瞬时表达 8
3.2.8 根癌农杆菌GV3101 转化茶树外植体瞬时及稳定表达 9
3.2.9 发根农杆菌ATCC15834 转化无菌茶籽苗 9
3.2.10 转基因毛发根DNA 提取及PCR 验证 9
4 结果与分析 10
4.1 茶树不同组织提取液对农杆菌生长和致病基因表达的影响 10
4.2 不同茶提取液对农杆菌转化烟草叶片的影响 10
4.3 茶鲜叶及愈伤组织提取液中主要次生代谢物质的检测 14
IV
万方数据
4.4 儿茶素混合物和咖啡碱对农杆菌生长和致病基因表达的影响 15
4.5 儿茶素对农杆菌转化烟草叶片瞬时及稳定表达的影响 15
4.6 农杆菌介导的茶树外植体瞬时及稳定表达 18
5 讨论20
6 结论22
参考文献23
附录28
致谢29
作者简介30
V
万方数据
1 文献综述
1.1 茶树转基因现状
茶树（Camellia sinensis （L. ）O. Kuntze ）是中国的重要经济作物，通过基因修饰
的方法改善其品质，对茶叶的经济发展非常重要。如今，茶叶在全世界广泛销售，并
[1]
且很多内含物质有益于人体健康 。由于茶树自身含有丰富的次生代谢物质，因此常
[2]
被用来研究黄酮类化合物代谢 。但是由于其生育周期
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