论文—食品中沙门氏菌的检验.doc

实验五 食品中沙门氏菌的检验 一、实验目的要求 了解食品的质量与沙门氏菌检验的意义。 掌握沙门氏菌的生物学特性。 掌握沙门氏菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。 掌握沙门氏菌属血清学试方法。 掌握食品中沙门氏菌检验的方法和技术。 二、原理 沙门菌属是一大群寄生于人类和动物肠道，其生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。种类繁多，少数只对人致病。其他对动物致病，偶尔可传染给人。主要引起人类伤寒，副伤寒以及食物中毒或败血症。在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌食物中毒常占首位或第二位。 食品中沙门氏菌的检验方法有五个基本步骤：1?前增菌；2?选择性增菌；3?选择性平板分离沙门氏菌；4?生化试验，鉴定到属；5?血清学分型鉴定。目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g食品为标准分析单位。 三、试剂和仪器 （一）最先准备的器材 规格名称 数量 用途 1、500ml广口瓶 1个 稀释样品 2、500ml三角瓶 1个 制缓冲蛋白胨水 3、250ml三角瓶 8个 制增菌液、培养基 4、15×150mm试管 18支 制三糖铁培养基和PH7.2尿素 5、13×130mm试管 30支 制蛋白胨水等 6、1ml移液管 5支 7、10ml移液管 2 支 8、直径为90 mm平皿 12套 制BS、SS平板 9、250ml量筒 1支 （二）应灭菌的其它器材 剪刀1把 不锈钢汤匙1把 称量纸适量 （三）应准备的培养基和试剂 培养基总量 所用容器 缓冲蛋白胨水(BP)： 1瓶 225ml/瓶 500ml三角瓶 氯化镁孔雀绿(MM)增菌液： 1瓶 100ml/瓶 250ml三角瓶 亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液： 1瓶 100ml/瓶 250ml三角瓶 亚硫酸铋琼脂(BS)： 4皿 1瓶 60ml/瓶 250ml三角瓶 SS琼脂： 6皿 1瓶 100ml/瓶 250ml三角瓶 三糖铁琼脂： 6支 6ml/支 40 ml 15×150mm试管 尿素琼脂(pH7.2)： 6支 4ml/支 25 ml 15×150mm试管 蛋白胨水： 6支 2ml/支 20 ml 13×100mm试管 氰化钾(KCN)培养基： 6支 4ml/支 30 ml 13×13 氨基酸脱羧酶试验培养基（赖氨酸）：6支 1ml/支 10 ml 13×13 氨基酸脱羧酶试验培养基（不含赖氨酸）：6支 1ml/支 10 ml 13×13 沙门氏菌因子血清：多价血清；11种因子血清。按26种用于初步分型；57种用于进一步分型；163种用于详细分型。 四、实验内容 样品处理→→前增菌→→选择性增菌→→选择性平板分离→→生化学试验→→血清学试验鉴别→→结果报告 第一天 样品处理和增菌培养 （一）样品处理 1、加工过的样品： 冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。称取检样25g，加在装有225mL缓冲蛋白陈水的500mL广口瓶内。固体食品可先应用均质器以8000～10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化，备用。 2、未加工样品： 鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。各取25g(25mL)加入灭菌生理盐水25mL，按前法做成检样匀液，备用。 （二）、前增菌和增菌 1、加工过的样品： 冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。 接种操作：将混均匀的稀释样液放在36±1℃培养4h(干蛋品培养18～24h)；移取10mL，转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液（MM）或四硫酸钠煌绿增菌液内，于42℃培养18～24h。同时，另取10mL，转种于100mL亚硒酸盐肮氨酸增菌液（SC）内。 培养：于36±1℃培养18～24h。 2、未加工样品： 鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。 接种操作：取25mL匀液，接种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液（MM）或四硫磺酸钠煌绿增菌液内，于42℃培养24h；另取25mL接种于100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）内 培养操作：于36±1℃培养18～24h。 第二天 接种选择性平板进行分离培养 （一）分离培养　　 接种操作：取前天增菌培养的增菌液1环，划线接种于一个亚硫酸铋琼脂平板（BS）和一个DHL琼脂平板(或HE琼脂平板、WS或SS琼脂平板)。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。 培养操作：于36±1℃分别培养18～24h(DHL、HE、WS、SS)或40～48h(BS)，观察各个平板上生长的菌落。 第三天 观察分离结果，从平板上挑取可疑菌落接