水貂阿留申病毒纳米PCR检测方法的建立与初步应用.pdfVIP

畜牧兽医学报 2016 ,47(11):2288-2293 Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica doi: 10. 11843/j. issn. 0366-6964. 2016.1 1. 017 水稻阿留申病毒纳米 PCR 检测方法 的建立与初步应用 杨瑞梅，张传美，张洪亮，单虎骨 (青岛农业大学动物科技学院，山东省预防兽医重点实验室，青岛 266109) 摘 要:为建立便捷、灵敏的水绍阿留申病病毒(AMDV)纳米 PCR 检测方法，根据 AMDV NSl 基因的保守序列 设计一对特异性引物，对纳米 PCR 反应的退火温度、胶体金浓度进行了优化;测序检测扩增基因是否发生变异;对 特异性和灵敏度进行了评估。结果表明，此纳米 PCR 的最佳退火温度为 51 .C ，普通 PCR 为 55 .C; 加入胶体金最 1 佳浓度在 0.2~0.8 nmol. L- ，纳米 PCR 与普通 PCR 产物测序相似性大于 99% 。特异性检测表明该纳米 PCR 方法只扩增 AMDV 而不能扩增犬瘟热病毒和水绍肠炎细小病毒。在粪尿样品检测中该纳米 PCR 敏感性比普通 PCR 高 10 倍。检测 40 份临床样品，结果表明该方法比对流免疫电泳检测敏感性提高，从而为用粪、尿等低病毒样 品检测水绍阿留申病提供了一种新的有效方法。 关键词:水绍阿留申病病毒;纳米 PCR;检测 中图分类号:S852.659.2 文献标志码:A 文章编号: 0366-6964(2016)11-2288-06 The Establishment and Application of Nanoparticle PCR Molecular Assay for Detection of Aleutian Mink Disease Virus YANG Rui-mei , ZHANG Chuan-mei , ZHANG Hong-liang , SHAN Hu CKey Laboratory of Preventive Veterinary Medicine of Shandong Province , College of Animal Sciences and Technology , Qingdao Agricultural University , Qingdao 266109 , China) Abstract: N anoparticle-assisted polymerase chain reaction CnanoPCR) is a novel method for the rapid amplification of DNA. This study was aimed to establish a simple and sensitive nanoPCR assay for detection of Aleutian mink disease virus CAMDV) , primers were designed based on the conserved region of the NS1 gene sequences available in GenBank to amplify a 365 bp fragment. The optimized annealing temperature and the concentration of gold nanoparticles were studied. Whether or not the DNA replication fi