猪附红细胞体巢式PCR诊断方法的建立及初步应用.pdfVIP

• 194 • 族病防治 中国畜牧得医 2011 年第 38 卷第 1 期 猪附红细胞体巢式 PCR 诊断方法的建立及初步应用 郑3号红1 ，邢萦l ，贾立军1 ，薛书江1 ，现克家2 ，张呼发l (1.延边大学农学院动物医学系，吉林延吉 133002;2. 吉林省东丰县大阳镇畜牧兽医站，吉林东卒 136309) 摘要:为建立一种更加准确、敏感的猪附红细胞体检测方法，本试脸根据猪附红细胞体特异的 DNA 序列(AJ504999)设计 2 对巢式 PCR 引物，建立了巢式 PCR 检测方法。筛选该检测方法的最佳反应条件，并进行了特异性、敏感性及临床样本检测 试验。结果表明，建立的巢式 PCR 对猪附红细胞体巢因缆。NA 能扩增出特异性片段，而对弓形虫、链球陶、牛蒜氏泰勒虫、 牛附红细胞体基因组 DNA 扩增反应结果均为阴性，DNA 最低检测量为 O. 124 fg/μL; 通过对 55 份临床样本的检测，该巢式 PCR 较常规 PCR 的阳性检出率高 23.7% 。本试验为猪附红细胞体病的诊断提供了一种更为特异、敏感的检测技术， 关键询:猪附红细胞体;巢式 PC议;建立;应用 文章编号:1671唰7236(2011)01 心194心4 中图分类号:S858.28 文献标i只码:A 猪附红细胞体病是由猪附红细胞体(Eperythω 1928 年，由英国 Schilling 首次报道(尚德秋，1994; rozoon suis) 寄生于虹细胞表面或游离于血浆及骨 Buchanan , 1974) 。该病早期呈隐性感染，不易被发 髓内引起的以发热、贫血、黄痛，青肥猪生长现绩，母 现，如果不能准确、快速、及早的诊断治疗，往往造成 猪不孕、流产等症状为特征的人兽，共患传染病(翻耀 严茧的经济损失(李慧平等，2008; 王君炜等，2003) 。 菊， 1994; Henderson 等， 1997) ;此病最早发现于 目前已有 ELISA、 PCR 等方法用于猪附红细胞体病 的诊断，但根据猪附红细胞体 DNA 序列(AJ504999) l除精日期:2010-07咀26 建立的巢式 PCR 方法用于诊断猪附红细胞体病的 作者简介:郑秀红(1982-).女，吉林人，硕士生，主要从事分子 免疫学Jr 丽的研究。 研究未见报道。因此，本试验根据该特异的 DNA i酒馆作者:张守发0954一) .省林人，教授，博士生导师，研究方 序列设计引物，建立一种更为准确、有效的针对猪附 向 z 分子免疫学。 虹细胞体的巢式 PCR 检测方法，并进行了临床初步 基金项目:国家自然科学基金项目 ，公益性行业(农 业)科研专项项目 (200903036-13) • 应用。 13 Reddy P L ,Shetty V T. Dutt D. Increased incidence of mitochon