烟草丛顶病毒编码的沉默抑制子初步鉴定.pdfVIP

云南农业大学学报 Journal of Yunnan A伊ic山山al Vniversity , 2011 , 26 (6): 749 -754 http://xb. 严皿也 edu. cn ISSN 1 佣4 - 390X; CODEN YNDXAX E-mail: xb@ 严UlU. edu. cn DOI: 10. 3969/j. issn. 1004-3佣X (n) .201 1.侃.∞3 烟草丛顶病毒编码的沉默抑制子初步鉴定* 张润1 气王连春1 ，陈海如1 ，李凡1 川 (1.云南农业大学，农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室，云南昆明 650201 ; 2. 云南农业大学农学与生物技术学院，云南昆明白0201) 摘要:烟草丛顶病毒 (Tohacco bushy top virus , TBTV) 为幽影病毒属成员，能在烟草上造成严重危害。 TBTV 基因组编码4 个ORF，其中 ORF3和 ORF4 几乎完全重叠，可能在 TBTV 的致病性中发挥重要作用。分别将 TBTV 的 ORF3和 ORF4 与载体 pGR107 连接，构建植物表达载体pGR107-0R凹， pGR107 -ORF4。经农杆菌与 含外源 GFP 基因的 pGREEN208 共浸润转 GFP 基因的本民烟 16c 叶片， 2 -5 d 后(days post-inoculation , dpi) 在紫外灯下观察发现浸润区有明显绿色荧光，其中 pGRI07-0RF4 在 12 dpi 后浸润区绿色荧光区域扩大，推断 ORF4 编码产物可能具有局部抑制本氏烟 16c 对外源 GFP 基因进行沉默的功能:而 pGRI07-0RF3浸润区绿色 荧光逐渐恢复红色， GFP 基因发生沉默，说明 ORF3编码产物不具有抑制基因沉默的功能。进一步利用 rω1- time PCR 定量检测发现， pGRI07-0RF4 浸润 15 dpi 的本氏烟叶片中 GFP RNA 的含量要比仅接种pGR107 的对 照高，比未接种的本氏烟 16c 稍低。推断是因为 ORF4 编码蛋白抑制了植物对外源 GFP RNA 产生的沉默，使 GFP 得以在本氏烟内表达。由此进一步证实 ORF4 编码产物是TBTV 的基因沉默抑制子。 关键词:烟草丛顶病毒; ORF3; ORF4; 沉默抑制子:鉴定 中图分类号: S 435. 72 文献标识码:A 文章编号: 1ω4 -3佣X (2011) 06-0749-06 Preliminary Identification of RNA Silencing Suppressors Encoded by Tobacco Bushy Top Virus 1 2 1 1 1 ZHANG Run • , WANG Lian-chun , CHEN Hai-ru , LI Fan (1. Key Laboratory of Agro-Biodiversity and Pest Management of Education Ministry of China , Kunming 650201 , China; 2. College of agriculture and biotechnology , Yunnan Agricultural Vniversity , Kunming 650201 , China) Abstract: Tob町co bushy t叩 virus (TBTV) is a distinct species of the genus Umbravirus