EL-MLPA技术的建立及MLPADHPLC在染色体非整倍体诊断中的应用分析.pdfVIP

山西医科大学硕士学位论文 前 言 前 言 前前 言言 21-三体综合征患者主要表现为智力低下、特殊面容、器官畸形等异常，给家庭和社 会造成极大负担。对此类病，至今无有效治疗方法；产前筛查和产前诊断是防止此类患儿 出生的有效手段。 目前对 21-三体综合征高危胎儿的筛查方法主要是唐氏筛查法，即通过测定中孕期母 血清中的标记物A-FP（甲胎蛋白）、β-hCG（人绒毛膜促性腺激素）、uE3(游离雌三醇)的 [1] 水平，结合孕妇年龄、体重及准确的孕周等，计算出胎儿患 D.S 等的风险率 ，但其假阳 性率很高，且有一定的漏检率。筛查高危时，建议其作羊水细胞染色体核型分析。由于羊 水穿刺为有创性检查，对操作者的技术要求高，有导致胎儿流产的可能；羊水细胞培养难 度大，周期长（需2周甚至更长），故不易被孕妇所接受。 [2] 超声测量胎儿颈项后透明带的厚度（NT）作为 21-三体综合征胎儿的另一筛查指标 ， 对操作者的经验、技巧及仪器设备等要求均很高，灵敏度低；并且受孕妇体重、糖尿病和 吸烟等影响，误差很大。因此研发一种假阳性率低，检出率高的无创伤性产前筛查技术是 目前研究的热点。 短串联重复序列(STR)是目前最常用的遗传标记，在人类基因组中广泛分布。具有高 度多态性、高杂合度、高信息含量、操作简便等特点，多用于人类基因组遗传图谱的制作、 肿瘤等疾病相关基因的定位及克隆、遗传性疾病的基因诊断、人类学群体遗传学的应用、 [3] 法医学的亲子鉴定和个体识别的研究 。位于 21 号染色体上的 STR 位点基因型在正常人 中表现为一条或 1:1 的二条带图谱，在 21-三体中表现为 1:1:1 三体图谱或 2:1 双倍 [4] 剂量图谱，3 条带图谱是诊断三体的金标准，双倍剂量图谱为辅助诊断指标 。本研究在 21 号染色体上 D.S 关键区（2lq2.1-21q2.2)或附近选择杂合度高的 8 个 STR 位点（D S ， 21 1446 D S ，D S ，D S ，D S ，D S ，D S ，D S )作为遗传标记，根据 STR 所表现 21 1437 21 1432 21 1413 21 1414 21 1270 21 1411 21 1412 出的图谱带特点即可做出诊断。 [5] MLPA 技术最先于 2002 年由 Schouten 等首次报道，有很多优点，现广泛应用于人 [6] 类基因或基因片段的缺失或重复、染色体三体型、染色体重排、肿瘤等的检测 ，但它不 能直接用于定量检测 STR 序列及包含 (CAG)n 等三核苷酸重复数目异常增加的等位基 因。本研究拟对 MLPA 进行改变，即改变 MLPA 探针杂交位置的设计方法，并在杂交完成 之后增加一个链延伸步骤，同时进行连接，PCR等，称为 EL-MLPA（Elongation- MLPA）； 使之能定量检测包含 STR 多态序列的等位基因，建立一种以孕妇外周血为样本、基于对 等位基因定量分析的无创产前筛查 21-三体综合征高风险胎儿的新技术。 资料和方法 资料和方法