中山大学分子生物学9.pptVIP

四、真核生物的基因转录及其调控 1. 真核生物的RNA聚合酶 RNA聚合酶I（polymerase I） 位于核仁 RNA聚合酶II （polymerase II） 位于核质 RNA聚合酶III （polymerase III） 位于核质 四、真核生物的基因转录及其调控 1. 真核生物的RNA聚合酶 （1）三种RNA聚合酶对转录抑制剂的反应 ?-鹅膏蕈碱（ ?-amanitin） 抑制polymerase II（低浓度） 抑制polymerase II 和polymerase III（高浓度） 放线菌素D（actinomycin D） 抑制polymerase I hnRNA heterogeneous nuclear RNA系heterogeneous nuclear之缩写。核内不均一RNA 为存在于真核生物细胞核中的不稳定、大小不均的一组高分子RNA（分子量约为105～2×107，沉降系数约为30—100S）之总称。占细胞全部RNA之百分之几，在核内主要存在于核仁的外侧。认为hnRNA多属信使RNA（messenger ribonucleic acid，mRNA）之先驱体，包括各种基因的转录产物及其成为mRNA前的各中间阶段的分子，在5’末端多附有间隙结构，而3’的末端附有多聚腺苷酸聚合酶分子。这些hnR-NA在受到加工之后，移至细胞质，作为mRNA而发挥其功能。大部分的hnRNA在核内与各种特异的蛋白质形成复合体而存在着。 四、真核生物的基因转录及其调控 1. 真核生物的RNA聚合酶 （2）真核RNA聚合酶的亚基组成 Polymerase I、II、III都由多个亚基组成 均有两个较大的亚基（ 100 kD） 另有多个较小的亚基（大部分 50 kD） 三种聚合酶都有一些共有亚基（common subunit） 以酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 的Pol II为参照：Rpb5、Rpb6、Rpb8、Rpb10、Rpb12 四、真核生物的基因转录及其调控 1. 真核生物的RNA聚合酶 （3）RNA聚合酶II的结构 研究得比较清楚的一种 有12个亚基（Saccharomyces cerevisiae中） Rpb1、 Rpb2、 Rpb3、 Rpb4、 Rpb5、 Rpb6、 Rpb7、 Rpb8、 Rpb9、 Rpb10、 Rpb11、 Rpb12 Rpb: RNA polymerase B (II) Principle of epitope tagging抗原决定部位（表位）标签法 四、真核生物的基因转录及其调控 1. 真核生物的RNA聚合酶 （3）RNA聚合酶II的结构 核心亚基（core subunits） Rpb1, Rpb2, Rpb3，对聚合酶的活性必不可少 分别与原核RNA聚合酶的?’, ?和?亚基同源，且功能也基本相同（Rpb3在聚合酶中也是有2个拷贝） Regions of homology between yeast Rpb1 and E. coli ?’ and between Rpb2 and ? 四、真核生物的基因转录及其调控 1. 真核生物的RNA聚合酶 （3）RNA聚合酶II的结构 共有亚基（common subunits） 与Rpb5, Rpb6, Rpb8, Rpb10, Rpb12相应的亚基，在3种 RNA聚合酶中都存在 在3种聚合酶中都存在，说明它们是起着十分重要的作用，但具体的功能不很清楚 四、真核生物的基因转录及其调控 1. 真核生物的RNA聚合酶 （3）RNA聚合酶II的结构 非必需亚基（nonessential subunits） Rpb4, Rpb9，其基因的突变体在正常温度下仍有活力，但在较高或较低温度下则失去活力 Rpb4和Rpb7（必需的亚基）与启动子的识别有关（有点像?因子） Rpb9的功能不甚清楚 四、真核生物的基因转录及其调控 1. 真核生物的RNA聚合酶 （3）RNA聚合酶II的结构 Rpb7和Rpb11 另类亚基（不属于上述3类） RNA聚合酶的活性所需（Rpb7与启动子的识别有关） 四、真核生物的基因转录及其调控 1. 真核生物的RNA聚合酶 （3）RNA聚合酶II的结构 核心亚基Rpb1的特殊之处 不均一性（heterogeneity） 在细胞内，有210 kD和240 kD两种形式（IIa和IIo）；在体外，还有180 kD这种形式（IIb） 与对?-鹅膏蕈碱的敏感性有关 Relationships among the different forms of Rpb1 Carboxyl terminal domain, CTD （羧基末端域）： A repeating string of Ty