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兰 州 理 工 大 学 现代生物仪器分析实验指导书 （四年制生物工程、食品科学与工程专业） 王永刚 编写 生命科学与工程学院 二零一二年十月 目 录 实验一、紫外吸收光谱法同时测定Vc和VE 3 实验二 气相色谱法测定酒或酊中C2H5OH含量 5 实验三 高效液相色谱法测定维生素B1含量 7 实验四 原子吸收分光光度法测定金属元素含量 10 实验一、紫外吸收光谱法同时测定Vc和VE 一、 实验目的 1． 掌握Cary 50紫外可见分光光度计的使用； 2． 学会用解联立方程组的方法，定量测定吸收曲线相互重叠的二元混合物。 二、方法原理 维生素C（抗坏血酸）和维生素E（ 生育酚）起抗氧剂作用，即它们在一定时间内能防止油酯变酪。两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧剂性能方面是“协同的”。因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。 抗坏血酸是水溶性的， 生育酚是酯溶性的，但它们都能溶于无水乙醇，因此，能用在同一溶液中测定双组分的原理来测定它们。 根据朗伯—比尔定律，用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对应的方法来进行定量测定。如：当两组分吸收峰部分重叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。 解联立方程组的方法是以朗伯—比尔定律及吸光度的加合性为基础，同时测定吸收光谱曲线相互重叠的二元组分的一种方法。从图中可以看出，混合组分在λ1的吸收A组分和B组分分别在λ1的吸光度之和Aλ1A+B，即 Aλ1A+B=κλ1AbcA+κλ1BbcB 同理，混合组分在λ2的吸光度之和Aλ2A+B应为 Aλ2A+B=κλ2AbcA+κλ2BbcB 若首先用A，B组分的标样，分别测得A，B两组分在λ1和λ2处的摩尔吸收系数κλ1A，κλ2A和κλ1B，κλ2B，当测得未知试样在λ1和λ2的吸光度Aλ1和Aλ2后，解下列二元一次方程组： Aλ1 =κλ1AbcA+κλ1BbcB Aλ2 =κλ2AbcA+κλ2BbcB 即可求得A，B两组分各自的浓度cA和cB。 一般来说，为了提高检测的灵敏度，λ1和λ2宜分别选择在A，B两组分最大吸收峰处或其附近。 三、仪器和试剂 仪器： Cary 50紫外可见分光光度计：美国瓦里安中国有限公司； 石英比色皿2只；50mL容量瓶9只，；10mL吸量管2只。 试剂：抗坏血酸：称3mg抗坏血酸，溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容于100mL； 生育酚：称8mg 生育酚溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容于100mL 四、实验步骤 1. 配制标准溶液 （1）分别取抗坏血酸贮备液1.00、1.50、2.00、2.50mL于4只10mL比色管中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。 （2）分别取生育酚贮备液1.00、1.50、2.00、2.50mL于4只10mL比色管中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。2. 绘制吸收光谱以无水乙醇为参比，在320~220nm范围测绘出抗坏血酸和生育酚的吸收光谱，并确定和。3. 绘制标准曲线以无水乙醇为参比，在波长和，分别测定步骤1配制的8个标准溶液的吸光度。4. 未知液的测定取未知液5.00mL于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。在和分别测其吸光度。 五、数据处理 1. 绘制抗坏血酸和生育酚的吸收光谱，确定和。2. 分别绘制抗坏血酸和生育酚在和时的4条标准曲线，求出4条直线的斜率，即、、和。3. 计算未知液中抗坏血酸和生育酚的浓度。 六、问题讨论 1． 今有吸收光谱曲线相互重叠的三元体系混合物，能否用解联立方程组的方法测定它们各自的含量？ 2．设计一个用双波长法测定本实验内容的实验方案。 七、实验报告要求 WORD文档打印，并作标注） 实验二 气相色谱法测定酒或酊中C2H5OH含量 一、目的要求 1．学习气相色谱法测定含水样品中的C2H5OH含量。 2．学习和熟悉氢火焰检测器的调试及使用方法。 3．学习和掌握色谱内标定量方法。 二、实验原理 内标法是一种准确而应用广泛的定量分析方法，操作条件和进样量不必严格控制，限制条件较少。当样品中组分不能全部流出色谱柱，某些组分在检测器上无信号或只需测定样品中的个别组分时，可采用内标法。 内标法就是将准确称量的纯物质作为内标物，加入到准确称取的样品中，根据内标物的质量m 。与样品的质量m 及相应的峰面积A 求出待测组分的含量。 待测组分质量mi与内标物质量ms 之比等于相应的峰面积之比。 式中：fi 、fs —— 为i 组分和内标物的相对质量校正因子； Ai 、As —— 为i