肿瘤坏死因子-α小分子抑制剂的设计、筛选及初步活性测定.pdfVIP

中国药搜学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 双脚 Oct;2S(IO) :1287 时 91 • 1287 • 肿瘤坏死囚子α 小分子抑制剂的设计、筛选及初步活性测定 谷岳，郭红星，纪庆，谢印良，黄旗，熊冬线，杨纯正，刘汉茫，许元宵 (中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学阁家重点实验室，夭津 3创J020) 中回回书分类号:民 329.25; 民 341. 6; R 392. 11; R 394.2; 普上边免疫性疾病的症状，又能抑制肿瘤的发生、生 R91;R977.6 长和转移山。宽今，已经有…将生物大分子 TNF咆 文献标识码:A 文章编号:1001 1978(2∞9) 10 叶287 … 05 的抑制刑相继被美阔 FDA 批准上市，如 Înfliximab 摘要:目的 结合计算机虚拟筛选和实物活性筛选，寻找新 (INF ，扰 TNF-α 的单克陪抗体) ，并巳经成为治疗风 的 TNF鸣的小分子抑制剂，并完成对其生物学活性的测定。 温性关节炎等炎性疾病的首烧药物[6-8] 。 方法 基于 TNF-α 受体蛋白的晶体结构和计算机辅助设 近年来，随着计算机辅助药物设计和晶体学研 计，用 docki略方法对含有约9 万个小分子兰维数据库进行 究的深入发展，使得订单式设计和筛选靶向药物 筛选:选择对接结果较好的 50 个化合物进行初步的抑制 成为可能。本研究即是基于计算机虑拟筛选和细胞 TNF-α 细胞毒活性实验; MTT 法进一步分析筛选出的小分 子化合物的细胞毒性，以且真在不问荆盘时抑制 TNF鸣对 活性筛选技术，从已有的小分子化合物的实物库中 L929 细胞毒性的作用;采用 Annexin V-FITC 检测上述小分 筛选 TNF-α 的抑制剂，为今后研制靶向 TNF咄分子 子对丁NF-α 诱导的细胞凋亡的抑制作用。结果 确定受体 的化学药物奠定理论和实脸基础。 p55 蛋白第二结构域的第二1∞p 环中7 肤(RKEMGQV)作为 1 材料句方法 docking 的配体模板;经计算机虑拟筛选后得到 965 种结构 1. 1 材料 相似的化合物，综合分析蹈最终选择并购买了 50 个代表性 1.1.1 试剂 RPMII640 培养基购于 Gibco 公司。 化食物做进…步生活性测远;洒性筛选结果显示有3 个小分 胎牛血清(FBS) 购自中国医学科学院血液学研究 子化合物(C-12 、 C-34 爪-35) 能抑制TNF喻的细胞毒活性;对 所。由TNF币、 rhTNF咄购于 PeproTech 公司(町， 其中抑制活性较好的 C-12 进行了深入研究的绵果农明:嵌 化合物具有校低的细胞毒性和较强的抑制 TNF-α (l J.Lg US);放线菌素。购于 Alexis 公司(CA ， US);Mπ、 L -1) 对 ω29 细胞毒性的作用，表现为jflJ 最依赖性，半数抑 DMSO 购于 Si阴阳公词( CA , U5)