转基因小鼠中应用RNAi的初步探讨.pdfVIP

• 74 • 中同畜牧兽医 2011 年第 38 卷第 5 期 生物技术 转基因小鼠中应用 RNAi 的初步探讨 2 陈志强l ，正东1tD. ，万家余2 ，潘朋朋2 ，华莎2 ，高宏伟z O. 黑龙江八…农果大学牛，命科学技术学院.黑龙江大庆 163319; 2. 中国人民解放军军事民学科学院军事兽医研究所.育林长眷 130062) 摘要:RNA 干扰(RNA interference.RNAj)是通过双链 RNA 介导，特异性地降解相应序列的 mRNA.从而导致转远是后水 平的某恻沉默。近年来.利用小分子民NA small interfering RNA， siRNA) 介导的 RNAi 技术已越来越多的应用于哺乳动物 细胞中。同时，在活体中利用民NAi 研究多种生物荔倒功能也成为一种1f效的手段。文直挺旨在介绍在转暴闲小鼠中 RNAi 的 应用。 关键询:RNA 干扰;RNA 双链z 转篡闵小鼠 文意编号:1671-7236(2011)侃-0074心4 中阁分类号:Q-3 文献标识码:A RNA 干扰(RNA Înterference , RNA i) ，是由内 complex ,RISC) ，诙复合体依颇 ATP 释能而使 siRNA 掘性戚外源性双锵 RNA (double- stranded RNA , ~链解聚成单链得以撒洒，活化的 RISC 通过由 dsRNA)诱发的问源 mRNA 高效特异性降解的现 siRNA 的喊毒草旦补配对原理切割具有问糠序列的 象(Fire 簿.1998); 这…机制可通过介导幕肉座位的 基因转录体，最终导致基因沉默放应。 1. 2 siRNA siRNA 是一种在 RNA 干扰过程中， 异染色质化或通过 DNA 水平的甲基化引起转最起 始水平的基因沉默(transcriptional gene silencing , 由 Dicer 酶圳工阳成的小分子 RNA(21-25 nt) ，是 丁GS) 或通过激活序列特异性的民NA 降解引起转 RNA 沉默过稠中对特定信使 RNA(mRNA)进行降 最后水亭的基因沉默(post-transcriptional gene sÎ- 解的重要因素。 1999 年， Hamilton 等在发生基因 lencing ,PTGS) 。相比基于间、服重组的基因融除技 共沉默的植物中鉴定了一将约 25 旧的 RNA，这略 术.RNAi 具有快速、高效、便于操作地使靶基因失 小 RNA 分别与沉默基阔的lE义链和反义链互补， 活的特点，有很大的优势。近年发现利用 RNAi 技 因此 25 nt RNA 的产生被认为是同掘性依确的 术在转基因小鼠中进行基因功能的研究具有很大潜 RNA 沉默的栋志;Zamore 等(2000) 通过体外试验 力，文章初步跟讨了如何在转蕃因小鼠中应用 班一步证实 dsRNA 能识别并破坏间糠的 mRNA; RNAi 的方法。 这些 siRNA 是 RNAi 通路的中间产物，能指导 1 RNAi RNA …蛋白质复合体，IlP RISC 破坏革E mRNA; 1. 1 RNAi 机制 首先由 Dícer 酶(RNase 田家腹 丁uschi 等测定了产生小 DNA 的序列，并证实合成 中对政链 RNA 具有特异性的酶)(Myers 等，2003)