反应5底物水平的磷酸化琥珀酰-CoA转化成琥珀酸,并产生.pptVIP

* 反应5：底物水平的磷酸化 琥珀酰-CoA转化成琥珀酸，并产生GTP。这是三羧酸循环中唯一一个底物水平磷酸化。 琥珀酰-CoA的硫酯键是一个高能硫酯键，它的势能可被用来驱动磷酸键的形成。 在琥珀酰-CoA合成酶的催化下，二磷酸鸟苷（GDP）磷酸化成三磷酸鸟苷（GTP）。 Succinyl-CoA + GDP + Pi succinate + GTP + CoASH △G0’= -29 kJ/mol 这个反应与酵解中的两个底物水平的磷酸化类似，不同的是在动物细胞中核苷酸产物不是ATP,而是GTP。 琥珀酰-CoA GTP可参与蛋白质合成。但大部分合成的GTP通过二磷酸核苷激酶的反应最终驱动ATP的合成。 在植物和细菌中，通过琥珀酰CoA和ADP直接合成ATP。 GTP + ADP GDP + ATP △G0’= 0.0 kJ/mol 在合成GTP或ATP的反应中，先形成脱水的琥珀酰磷酸，然后通过使琥珀酰-CoA合成酶的一个特定的组氨酸磷酸化使酶活化。 N-磷酸组氨酸再把其磷酸转移到核苷二磷酸底物。 琥珀酰-CoA合成酶催化的反应中N-磷酸组氨酸残基的结构 反应6：依赖于黄素的脱氢 反应6，7和8把4碳的琥珀酸转换成4碳的草酰乙酸。这三个反应的第一个是由琥珀酸脱氢酶催化的，依赖于FAD的脱氢。这是三羧酸循环中第三个氧化还原反应，琥珀酸脱氢生成延胡索酸。 氢的受体是酶的辅基FAD，这个反应自由能变化不足以还原NAD+。 FAD是通过异咯嗪环上的第8（7）位碳上的甲基与酶蛋白质中的组氨酸残基上的咪唑环氮3连接。 黄素辅酶 有两种从维生素B2或核黄素 (riboflavin)衍生出来的辅酶： ·黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide, FAD） ·黄素单核苷酸（flavin mononucleotide, FMN）。 异咯嗪 核糖醇 核黄素 黄素单核苷酸 黄素腺嘌呤二核苷酸 还原的黄素需要再氧化以便使琥珀酸脱氢酶能再参与反应。因琥珀酸脱氢酶可直接与位于线粒体内膜的电子传递系统联接，琥珀酸脱氢产生的还原的黄素（FADH2)可以转移到酶的铁硫中心，然后进入电子传递系统再氧化。 琥珀酸脱氢酶中含有三种不同的铁硫簇：2Fe-2S(两个铁原子与两个无机硫结合)，3Fe-3S和4Fe-4S。 琥珀酸脱氢酶是三羧酸循环中唯一位于线粒体内膜的酶。心肌线粒体内膜提纯的酶分子量是100000，由70000和29000两个亚基组成。 琥珀酸脱氢酶也有立体专一性，只形成反式异构体延胡索酸（反丁烯二酸），不形成顺式异构体马来酸（顺丁烯二酸）。马来酸不能参加代谢，对有机体有毒性。 丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。 反应7：碳-碳双键的水合反应 延胡索酸水化生成苹果酸 延胡索酸酶催化这个立体专一水化反应。用标记氘的实验证明H+和OH- 以反式加成，酶具有立体异构特异性，OH-只加入延胡索酸双键的一侧，因此只形成L-苹果酸。延胡索酸的异构体马来酸不是这个酶的底物，这个酶也不能催化从D-苹果酸脱水生成延胡索酸的逆反应。 延胡索酸酶分子量为200000，由4个相同亚基组成，每个亚基含3个自由巯基，是 酶活性所必需的。已从猪心制备了延胡索酸酶结晶。 反应8：脱氢产生进入下一轮循环的底物 苹果酸脱氢生成草酰乙酸。 这是三羧酸循环中第4次氧化还原反应。L-苹果酸脱氢酶催化依赖于NAD+的脱氢，完成循环。NAD+接受氢还原成NADH。 在标准热力学条件下，平衡有利于逆反应。但是在生理条件下，反应产物草酰乙酸因不断合成柠檬酸而减少，使其在细胞中浓度极低，约少于10-6mol/L，使反应向右进行。 + + 三羧酸循环反应的总结 △G0’